毒滅菌實是采用多種物理、化學(xué)或生物學(xué)方法使細(xì)菌的生長代謝活動受到抑制、甚至死亡。消毒滅菌在醫(yī)學(xué)實踐上有著重要意義:可切斷傳播途徑、控制感染擴散造成的危害;也可殺滅物品或器皿上的細(xì)菌,防止醫(yī)院感染;是保證感染的病原學(xué)檢驗不受外來微生物污染的前提。
1.常用術(shù)語:
(1)滅菌 是破壞和去除物體上所有微生物(包括病原微生物和非病原微生物)和細(xì)菌芽胞的方法。如外科器械、注射器、基礎(chǔ)培養(yǎng)基滅菌等。
(2)消毒 是破壞物體上活的病原微生物的方法,但不包括細(xì)菌芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡體溫計、潔而滅液擦拭檢查臺等。用于消毒的化學(xué)物品稱消毒劑。一般而言,消毒對象是指物體而不是機體。
(3)防腐 直接使用防腐劑破壞或抑制活病原微生物方法。如外科手術(shù)前碘液擦洗皮膚、雙氧水清創(chuàng)傷口或殺菌肥皂清洗雙手等應(yīng)當(dāng)使用該術(shù)語。
(4)無菌 防止感染病原體進入滅菌組織或物品的操作技術(shù)稱無菌操作,無菌即為不存在活微生物。
2.物理消毒滅菌法
(1)熱力消毒滅菌法 利用高熱使蛋白質(zhì)分子運動加快,肽鏈連接鍵斷裂,蛋白變性凝固,細(xì)胞膜功能受損致胞內(nèi)物質(zhì)漏出,細(xì)菌內(nèi)外環(huán)境平衡失調(diào),從而導(dǎo)致微生物死亡。不同種類微生物對熱的耐受力不同,有芽胞細(xì)菌對高溫有強的抵抗力。熱力滅菌分干熱滅菌法和濕熱滅菌法兩大類,相同溫度下,濕熱環(huán)境中菌體蛋白易凝固,穿透力比干熱大,其蒸氣變?yōu)橐簯B(tài)時可釋放潛熱,迅速提高被滅菌物體的溫度。
1)干熱滅菌法 包括:①焚燒:直接點燃或在焚燒爐內(nèi)進行,僅適用于廢棄物品或動物尸體。②燒灼:直接以火焰滅菌,適用于微生物學(xué)實驗室接種環(huán)、針和試管口等滅菌。③干烤 在干烤箱內(nèi)進行,加熱至150℃~180℃2~4h達到滅菌效果,適用于高溫下不變質(zhì)、不被破壞和不蒸發(fā)的物品,如玻璃器皿、瓷器,不能用于塑料、棉、紙制品。
2)濕熱滅菌法 包括:①巴氏消毒法:是用較低溫度殺滅液體中的病原微生物或特定微生物而保持物品中所需的不耐熱成分的方法。大多采用71.6℃加熱15秒,用于牛乳消毒。②煮沸法:在一個大氣壓下,煮沸后的水溫度達100℃,煮沸5min后可殺死一般細(xì)菌繁殖體。③流通蒸氣消毒法:又稱常壓蒸氣消毒法,常用阿諾(Arnold)流通蒸氣滅菌器或蒸籠,利用1個大氣壓下100℃水蒸氣進行消毒,10~30min后細(xì)菌繁殖體被殺死,但對芽胞作用不大。④間歇滅菌法:采用間歇方式達到滅菌目的。將滅菌物品置于阿諾流通蒸氣滅菌器內(nèi),100℃加熱15~30min,每日一次,連續(xù)三次。每次滅菌后取出物品置37℃孵育箱過夜,致殘存的芽胞發(fā)育成繁殖體,次日再通過流通蒸氣滅菌器加熱而被殺滅。如此反復(fù)以達到殺滅芽胞又使不耐高溫的物質(zhì)免受影響。常用血清凝固器對呂氏血清培養(yǎng)基和魯琴培養(yǎng)基的滅菌屬此方法。⑤高壓蒸氣滅菌法 利用密閉的耐高壓蒸氣滅菌器,在蒸氣不外溢的條件下,使鍋內(nèi)壓力增高,隨之蒸氣溫度也增高。通常在103.4kpa壓力下蒸氣溫度達到121.3℃, 維持15~20min可殺滅所有的繁殖體和芽胞。本法適用于耐高溫、耐濕物品的滅菌,如普通培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等。
(2)輻射法
1)電離輻射 能產(chǎn)生電離輻射效應(yīng)的有X射線、Γ射線、陰極射線。受照射后,敏感的靶物質(zhì)如細(xì)菌DNA吸收了射線產(chǎn)生能量,產(chǎn)生較大范圍的突變,或產(chǎn)生毒性物質(zhì)如自由基可破壞微生物核酸產(chǎn)生致死作用。電離輻射由于滅菌時不產(chǎn)生熱量又稱“冷滅菌法”,適用于對熱敏感的物品及化學(xué)物質(zhì)的滅菌,如一次性醫(yī)用塑料制品和移植組織(骨、皮膚、心瓣膜等)和食品滅菌。
2)非電離輻射
①紫外線 殺菌紫外線波長為240~280nm,它作用于DNA鏈上相鄰兩個胸腺嘧啶或胞嘧啶,共價結(jié)合形成二聚體而干擾DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄,導(dǎo)致細(xì)菌的死亡。紫外線穿透力弱,故常用于空氣消毒和不耐熱物品表面消毒。
②微波 是波長為1~103 nm的電磁波,可穿透玻璃、陶瓷、塑料薄膜等物質(zhì),常用于檢驗室用品、食品食具、藥杯及其他用品的消毒。
(3)聲波 超聲波的空化作用破壞了細(xì)菌原生質(zhì)膠體狀態(tài)導(dǎo)致細(xì)菌裂解。革蘭陰性菌對其敏感。主要用于細(xì)菌細(xì)胞粉碎以提取細(xì)胞的組分或制備抗原。
(4)濾過除菌法 以物理阻留的方式將液體或空氣中的微生物除去以達到無菌目的。用于不耐高溫物品如血清、抗毒素、抗生素等的滅菌,超靜工作臺和層流室空氣也用濾過法除菌。
3.化學(xué)消毒滅菌法 化學(xué)藥物使菌體蛋白變性沉淀、干擾微生物酶系統(tǒng)影響其代謝和損傷細(xì)菌細(xì)胞膜,導(dǎo)致菌體內(nèi)容物漏出,而發(fā)揮防腐、消毒和滅菌作用。只能外用或用于環(huán)境物品的消毒。
(1)化學(xué)消毒劑的種類:
1)根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)不同分類 可以分成酶類、醇類、重金屬鹽類、氧化劑、表面活性劑、烷化劑、染料、酸堿類等。
2)根據(jù)殺滅微生物作用強弱分類:
①高效消毒劑 可殺滅一切微生物。如戊二醛、甲醛、環(huán)氧乙烷、過氧乙酸等。
②中效消毒劑 殺滅除芽胞以外的微生物。如乙醇、碘伏等。
③低效消毒劑 不能殺滅芽胞、結(jié)核分枝桿菌。如氯己定、苯扎溴銨等。
影響消毒劑效能的因素 通常消毒劑的濃度和作用時間與消毒劑殺滅微生物的效能成正相關(guān),但也有例外,如乙醇,其濃度為70~75%時殺菌力最強。影響消毒劑作用的因素有①消毒劑的性質(zhì)、濃度和作用時間;②微生物的種類與數(shù)量;③溫度與濕度;④酸堿度;⑤環(huán)境中有機物存在的拮抗;⑥其他化學(xué)拮抗物質(zhì)。
(3)常用化學(xué)消毒劑的應(yīng)用
①鹵素化合物 是有效的殺菌和滅菌劑,用于水、食品、設(shè)施消毒。如碘伏常用作于皮膚的除菌。
②酚類化合物 是強效殺菌劑,通常用于物品消毒。
③醇類 一般起抑菌作用。
④過氧化氫 用于傷口防腐和器具消毒。高濃度的過氧化氫有殺滅芽胞性能。
⑤表面活性劑 用于皮膚粘膜除菌和器具消毒。
⑥醛類 破壞微生物酶系統(tǒng),有潛在滅菌作用。
⑦烷化劑 具高效的殺菌性能,是高效殺菌劑。