一、用途

彎曲桿菌乳膠凝集快速檢測試劑用于快速確證鑒定細(xì)菌性腸炎病人的糞便樣品在選擇性平板上分離出的可疑腸道致病性的嗜溫性彎曲桿菌菌落。該試劑盒僅供專業(yè)人員使用。

二、原理

乳膠顆粒表面包被有與空腸彎曲桿菌血清型抗原具有特異性的兔免疫球蛋白，當(dāng)敏化的乳膠顆粒遇到彎曲桿菌致病菌的抗原時(shí)，可發(fā)生特異性、高靈敏度的免疫化學(xué)反應(yīng)，使分散的乳膠微粒迅速形成肉眼可見的凝集。

三、試劑盒組成成分

REAG TEST  測試試劑　M46a 彎曲桿菌乳膠測試試劑　2.5mL

乳膠顆粒包被與彎曲桿菌抗原具有特異性的兔抗體。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（藍(lán)色瓶蓋）

REAG CONTROL  對照試劑　M46b　陰性對照乳膠試劑　　　　2.5mL

乳膠顆粒包被有非特異性的兔免疫球蛋白，含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（白色瓶蓋）

CONTROL +  陽性對照試劑　M46c 陽性對照試劑　　　　1.0mL

不具活性的彎曲桿菌抗原，與測試乳膠試劑反應(yīng)，但不與對照乳膠試劑反應(yīng)。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（黑色瓶蓋）

SAMP DIL  樣品稀釋液　　M46d 樣品稀釋液　　50mL

甘氨酸緩沖鹽水，含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。

使用說明書

檢測板

攪拌棒

需要的其它材料

l       接種環(huán)

l       彎曲桿菌選擇性平板

l       塑料樣品試管（容積1mL）

l       維持微需氧環(huán)境的氣罐

l       42℃培養(yǎng)箱（如果沒有，可以使用37℃培養(yǎng)箱）

四、警告和注意事項(xiàng)

安全：

1、試劑僅供體外診斷使用

2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物�？捎么罅克疀_洗以避免疊氮化物的堆積。

3、在處理或檢測可疑致病菌時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。

4、陽性對照液在生產(chǎn)中已作惰性處理。但在使用中，依然應(yīng)遵循潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序。

檢測過程：

1、試劑盒應(yīng)按說明書使用。

2、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。

3、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑。

4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。

5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。

6、不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到陽性對照試劑或細(xì)菌樣品。

7、使用前應(yīng)確保檢測板清潔干燥。

五、貯存及保質(zhì)期

檢測試劑盒不使用時(shí)應(yīng)貯存在2～8℃，并應(yīng)在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測試劑。

六、樣本

糞便樣品應(yīng)先在無血的選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)（改良CCDA Preston培養(yǎng)基）(見附錄)，每個(gè)平板接種0.2～0.3克的樣品，平板應(yīng)在微氧環(huán)境中42℃培養(yǎng)48小時(shí)。

用乳膠凝集試劑檢測選擇性分離平板上的可疑彎曲桿菌菌落。

七、檢測過程

質(zhì)量控制：

在每次使用檢測試劑盒前應(yīng)用陽性對照作下列質(zhì)量控制檢測，以確保試劑有效。

1、分別滴1滴50μL陽性對照于檢測板的2個(gè)相鄰反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

2、然后分別用測試液和對照液按以下“測試程序”進(jìn)行檢測。

3、如果出現(xiàn)下列情況，試劑可能出現(xiàn)變質(zhì)：

l       陽性對照與測試試劑無反應(yīng)或反應(yīng)的強(qiáng)度隨時(shí)間減弱。

l       陰性對照試劑與陽性對照發(fā)生反應(yīng)。

l       測試試劑變成無色或結(jié)塊并無法搖成均勻懸浮液。

測試程序：

1、待所有試劑達(dá)到室溫時(shí)，將測試乳膠試劑輕輕地?fù)u成均勻的懸浮液。

2、分別滴加50μL的稀釋樣品液于檢測板的2個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)

3、分別用接種環(huán)挑取幾個(gè)可疑的彎曲桿菌菌落與反應(yīng)環(huán)內(nèi)的稀釋樣品液混合，形成均勻的菌懸液。如果平板上的菌落較稀小，應(yīng)在平板表面挑取更多的菌落。

4、于1個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液中滴1滴（50μL）陰性對照試劑，同樣的于另1個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液中滴1滴（50μL）乳膠測試試劑。

5、用1支攪拌棒在整個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)混勻陰性對照試劑和菌懸液，然后再混勻測試試劑和菌懸液。

6、輕搖檢測板，使混勻液在反應(yīng)環(huán)內(nèi)輕輕流動2分鐘，觀察凝集結(jié)果。

7、按下表判斷結(jié)果。

8、記錄結(jié)果后，將攪拌棒和檢測板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南�毒處理�?/span>

八、結(jié)果說明

凝集反應(yīng)出現(xiàn)肉眼可見的乳膠顆粒聚集，其反應(yīng)強(qiáng)度會有所不同，可依據(jù)下列原則判斷：

＋ 凝集顆粒較細(xì)，但易于辨別，背景為乳狀。

＋＋顆粒較粗，背景為乳狀。

＋＋＋顯著的凝集聚集于橢圓形反應(yīng)環(huán)的內(nèi)邊緣，背景清晰。

彎曲桿菌乳膠凝集試劑盒的結(jié)果，說明如下：

如果樣品引起質(zhì)量控制試劑凝集，即不可用乳膠試劑盒檢測。

九、使用的局限性

1、結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床和實(shí)驗(yàn)室信息進(jìn)行判斷。

2、非特異性凝集不排除存在彎曲桿菌的可能性，只是結(jié)果不確定。樣品應(yīng)采用其它方法檢測。

3、彎曲桿菌數(shù)量過低時(shí)，可導(dǎo)致陰性結(jié)果。應(yīng)檢測48小時(shí)的培養(yǎng)物，以使其數(shù)量達(dá)到最大值。

十、檢測效果對比

分別在兩個(gè)獨(dú)立的檢測中心和公司內(nèi)部對Microscreen彎曲桿菌乳膠試劑盒確證檢測效果進(jìn)行評價(jià)。527份糞便樣品經(jīng)選擇性平板上接種培養(yǎng)48小時(shí)，用Microscreen彎曲桿菌乳膠試劑盒測試其菌落。

靈敏度：143/145=98.6%

特異性：381/382=99.7%

有效性：524/527=99.4%

通過測試以下大量不同的菌株的培養(yǎng)物來驗(yàn)證Microscreen彎曲桿菌乳膠試劑盒的特異性：

所有測試的嗜溫彎曲桿菌均與Microscreen彎曲桿菌乳膠試劑反應(yīng)。測試的11株非嗜溫性的彎曲桿菌中，3株呈現(xiàn)出微弱的非特異性凝集，其余的均不與乳膠試劑反應(yīng)。

在相近的有關(guān)聯(lián)的細(xì)菌組中，2株Helicobacter pylori(共有12株)在測試中呈現(xiàn)微弱反應(yīng)，2株Helicobater cinaedi 出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

測試了大范圍的其它無關(guān)聯(lián)的細(xì)菌，除了1株鮑氏不動桿菌呈現(xiàn)出較強(qiáng)的非特異性凝集外，其余均不與乳膠試劑反應(yīng)。

十一、重復(fù)性

批內(nèi)重復(fù)性：通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對照抗原對同1批產(chǎn)品的靈敏度進(jìn)行檢測。由不同的操作者隨機(jī)測試3次，最終效價(jià)由參照/對照抗原測定，并且3次定性分析結(jié)果完全一致。

批間的重復(fù)性：通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對照抗原對3批產(chǎn)品的靈敏度進(jìn)行檢測。3個(gè)批次間，最終效價(jià)無顯著差異。

附錄

準(zhǔn)備無血選擇性培養(yǎng)基—改良CCDA  Preston.

1、  稱取22.75g彎曲桿菌無血選擇性基礎(chǔ)培養(yǎng)基(Campylobacter Blood-Free Selective Agar Base (Oxoid CM739))，溶于500mL蒸餾水中，煮沸溶解。

2、121℃高壓蒸汽滅菌15分鐘。

3、培養(yǎng)基冷卻至50℃，無菌條件添加1支氨哌羥苯唑頭孢菌素選擇性添加劑(Cefoperazone Selective Supplement (Oxoid SR125))。