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M41 艱難梭狀芽孢桿菌乳膠凝集試劑盒(M41 MICROSCREEN®C. DIFFICILE)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-08-04   來(lái)源:食品伙伴網(wǎng)整理   瀏覽次數(shù):163
艱難梭狀芽孢桿菌乳膠凝集檢測(cè)試劑用于確證鑒定從假膜性結(jié)腸炎、與抗生素有關(guān)的腹瀉和手術(shù)后腹瀉病人的糞便樣品中分離出的艱難梭狀芽孢桿菌可疑菌落。

一、用途

艱難梭狀芽孢桿菌乳膠凝集檢測(cè)試劑用于確證鑒定從假膜性結(jié)腸炎、與抗生素有關(guān)的腹瀉和手術(shù)后腹瀉病人的糞便樣品中分離出的艱難梭狀芽孢桿菌可疑菌落。該試劑盒僅供專(zhuān)業(yè)人員使用。

 

二、原理

乳膠顆粒表面包被與艱難梭狀芽孢桿菌細(xì)胞壁抗原具有特異性的兔免疫球蛋白抗體。當(dāng)敏化的乳膠顆粒與艱難梭狀芽孢桿菌菌懸液混合后,敏感而特異的免疫化學(xué)反應(yīng)可使乳膠顆粒迅速形成肉眼可見(jiàn)的凝集。

 

三、試劑盒組成成分

REAG TEST 測(cè)試試劑 M41a 艱難梭狀芽孢桿菌乳膠試劑 2.5mL

乳膠顆粒包被與艱難梭狀芽孢桿菌抗原具有特異性的兔免疫球蛋白。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(藍(lán)色瓶蓋)

CONTROL +  陽(yáng)性對(duì)照試劑 M41b 陽(yáng)性對(duì)照  0.5mL

不具活性的艱難梭狀芽孢桿菌抗原,用于與測(cè)試試劑反應(yīng)。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(黑色瓶蓋)

NaCl 0.85%  0.85%鹽水 M40 0.85%生理鹽水 5.0mL

0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(白色瓶蓋)

 

使用說(shuō)明書(shū)

檢測(cè)板

攪拌棒

 

需要的其它材料

l         接種環(huán)

l         梭狀芽孢桿菌的選擇性分離平板(CCFACCEY

 

四、警告和注意事項(xiàng)

安全:

1、試劑僅供體外診斷使用。

2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物?捎么罅克疀_洗以避免疊氮化物的堆積。

3、在處理或檢測(cè)可疑致病菌時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。

4、陽(yáng)性對(duì)照液在生產(chǎn)中已作惰性處理,但仍應(yīng)遵循潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序。

 

檢測(cè)過(guò)程:

1、試劑盒應(yīng)按說(shuō)明書(shū)使用。

2、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。

3、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑

4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。

5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。

6、不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到陽(yáng)性對(duì)照試劑或細(xì)菌樣品。

7、使用前應(yīng)確保檢測(cè)板清潔干燥。

8、如果陽(yáng)性對(duì)照不發(fā)生凝集或乳膠試劑在生理鹽水中自凝,說(shuō)明試劑已無(wú)效。應(yīng)使用新的試劑盒。

 

 

五、貯存及保質(zhì)期

檢測(cè)試劑盒不使用時(shí)應(yīng)貯存在28℃,并應(yīng)在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測(cè)試劑。

 

六、樣本

糞便樣品應(yīng)接種于增菌肉湯中在37℃培養(yǎng)1824小時(shí)后,然后在選擇性平板(CCFACCEY)上培養(yǎng)增菌液。平板應(yīng)在厭氧環(huán)境中37℃培養(yǎng)2448小時(shí)。

挑取選擇性分離平板上的艱難梭狀芽孢桿菌可疑菌落,用該試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。(程序如下)

 

七、檢測(cè)過(guò)程

質(zhì)量控制:

在每次使用檢測(cè)試劑盒前應(yīng)作下列質(zhì)量控制檢測(cè),以確證試劑的有效性。

1、檢測(cè)試劑的控制:滴加1滴生理鹽水(M40)于一個(gè)測(cè)試反應(yīng)環(huán)內(nèi),然后在同一反應(yīng)環(huán)內(nèi)滴1滴測(cè)試試劑(M41a),再用攪拌棒在整個(gè)區(qū)域內(nèi)混勻液體,并觀(guān)察是否會(huì)出現(xiàn)凝集。應(yīng)無(wú)凝集發(fā)生。如果出現(xiàn)凝集反應(yīng),表明檢測(cè)試劑或生理鹽水受到污染,應(yīng)廢棄處理。

2、陽(yáng)性對(duì)照的控制:輕輕搖勻陽(yáng)性對(duì)照試劑(M41a),并滴1滴于測(cè)試反應(yīng)環(huán)內(nèi),然后滴1滴測(cè)試試劑(M41a)于同一個(gè)測(cè)試反應(yīng)環(huán)內(nèi),再用攪拌棒混勻液體, 2分鐘并觀(guān)察凝集。如果未出現(xiàn)凝集反應(yīng),則應(yīng)廢棄該檢測(cè)試劑盒。

測(cè)試程序:

1、滴1滴生理鹽水(M40)于潔凈的檢測(cè)板上的一個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

2、用接種環(huán)從選擇性分離平板上挑取可疑菌落,與反應(yīng)環(huán)內(nèi)的生理鹽水混合,形成均勻的菌懸液。

3、觀(guān)察菌懸液是否會(huì)出現(xiàn)自動(dòng)凝集現(xiàn)象。如果出現(xiàn)自凝現(xiàn)象,即不可用乳膠試劑檢測(cè)該菌株。應(yīng)選用其它的檢測(cè)方法。如果沒(méi)有出現(xiàn)凝集,進(jìn)行下一步測(cè)試。

4、輕輕搖勻乳膠測(cè)試試劑后,滴1滴至反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液中,不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到菌懸液。

5、用1支干凈的攪拌棒混合菌懸液和測(cè)試試劑約30秒,然后輕搖檢測(cè)板。

6、在2分鐘內(nèi)觀(guān)察凝集結(jié)果。

7、記錄結(jié)果后,將攪拌棒和檢測(cè)板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南咎幚怼?/span>

 

八、結(jié)果說(shuō)明

2分鐘內(nèi)出現(xiàn)凝集,表明樣品中有艱難梭狀芽孢桿菌,如不出現(xiàn)凝集,表明測(cè)試菌落中無(wú)艱難梭狀芽孢桿菌。

 

九、使用的局限性

1、結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床和實(shí)驗(yàn)室信息進(jìn)行判斷。分離出艱難梭狀芽孢桿菌不能確診假膜性結(jié)腸炎或抗生素性腹瀉。

2、使用乳膠試劑檢測(cè)艱難梭狀芽孢桿菌時(shí)應(yīng)選取選擇性平板上可疑菌落,以提高分離率。

3、其它的梭狀芽孢桿菌偶爾也可在CCFA平板上生長(zhǎng),但它們?cè)?/span>CCEY平板上的菌落形態(tài)與艱難梭狀芽孢桿菌不同,或不生長(zhǎng)。

4、分離出的可疑艱難梭狀芽孢桿菌發(fā)生自凝現(xiàn)象時(shí),不可采用乳膠試劑檢測(cè),應(yīng)選用其它方法檢測(cè)。

 

十、檢測(cè)效果對(duì)比

在一個(gè)獨(dú)立的英國(guó)微生物實(shí)驗(yàn)室和和公司內(nèi)部均分別對(duì)Microscreen 艱難梭狀芽孢桿菌乳膠試劑盒與一種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒做了測(cè)試效果對(duì)比。用二種商品共檢測(cè)137株在選擇性平板上生長(zhǎng)的菌落。

 

 

Microscreen

總計(jì)

陽(yáng)性

陰性

另一已廣泛使用的乳膠試劑盒

陽(yáng)性

85

0

85

陰性

0

52**

52

總計(jì)

85

52

 

靈敏度 185/85100%

特異性 52/52100%

一致性 137/137100%

檢測(cè)樣品中分離出的85株,其中18株在二種試劑盒中均存在交叉反應(yīng),但其中的16株不會(huì)在艱難梭狀芽孢桿菌的選擇性平板中生長(zhǎng)或其生長(zhǎng)時(shí)菌落形態(tài)與艱難梭狀芽孢桿菌不同。另外2株(均為C.glycolicum)在其平板上可弱生長(zhǎng),但菌落不具有大多數(shù)艱難梭狀芽孢桿菌所特有的熒光。

**其中有2株艱難梭狀芽孢桿菌(血清型A9、A10)。其中1株(A10)顯示出輕微異常的菌落形態(tài),其余的50株包括不同種的細(xì)菌,其中5株為梭狀芽孢桿菌屬。大部分單個(gè)菌落不會(huì)在艱難梭狀芽孢桿菌的選擇性平板上生長(zhǎng) 或生長(zhǎng)時(shí)顯示出非典型的可疑菌落。

測(cè)試結(jié)果顯示Microscreen乳膠凝集檢測(cè)試劑盒與這種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒檢測(cè)效果相當(dāng)。盡管少量菌株在2種試劑盒中均存在假陽(yáng)性結(jié)果,但在艱難梭狀芽孢桿菌的選擇性平板上,不會(huì)生長(zhǎng)或菌落形態(tài)不同。 

  總的來(lái)說(shuō),用Microscreen艱難梭菌乳膠凝集檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果與所對(duì)比的另一商業(yè)化產(chǎn)品結(jié)果一致。

 

 

十一、重復(fù)性

批內(nèi)重復(fù)性:通過(guò)以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對(duì)照抗原及一組質(zhì)控菌株對(duì)同1批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。由不同的操作者隨機(jī)測(cè)試3次,3個(gè)操作者間分析結(jié)果無(wú)顯著差異。

批間的重復(fù)性:通過(guò)以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對(duì)照抗原及一組質(zhì)控菌株對(duì)3批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。3個(gè)批次間的敏感性和特異性無(wú)差異。

廣東環(huán)凱微生物科技有限公司  電話(huà):020-32077703
編輯:foodnews

 
 
  
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