一、目的要求 |
1、了解電子捕獲檢測器(ECD)的檢測原理和使用方法。
2、掌握農(nóng)藥殘留量的測定方法。
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二、基本原理 |
ECD是一種選擇性檢測器,對含X、S、P、N、O電負(fù)性強的物質(zhì),影響很大,而對非電負(fù)性物質(zhì),則影響很小。
放射源(3H或63Ni)產(chǎn)生的B射線將載氣N2電離成正離子和電子,這些離子和電子在電場作用下形成“基流”。當(dāng)電負(fù)
性樣品進入檢測器后,便捕獲自由電子,形成的負(fù)離子和載氣的正離子結(jié)合為中性分子,以使基流下降,產(chǎn)生對應(yīng)的
負(fù)信號——倒峰。在一定范圍內(nèi),檢測器的響應(yīng)信號和樣品組分的濃度成正比。
六六六、DDT是目前用量叫大的有機農(nóng)藥,其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,施用后殘留在大氣、土壤、水體、植物中不易消失,對
人體健康不利。
本法利用己烷提取樣品,采用0.23%OV-17和2.8%OV-210混合固體液分離,ECD檢測器,外標(biāo)法定量。
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三、儀器與試劑 |
儀器:氣相色譜儀,ECD;離心機;布氏漏斗;0.5*22cm玻璃層析柱;1000ml分液漏斗2只
試劑:無水硫酸鈉、硫酸鈉、己烷、丙酮、濃硫酸(均為AR);硅藻土(30—30目)、OV—17、OV—210(色譜級)、
Chromosorb WAW—DMCS;α-666、β-666、γ—666、δ—666、p,p'—DDE、o,p一DDT、p,p'一DDD,p,p'
—DDT。?
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四、實驗步驟 |
1.色譜條件:
Φ3mm×2m玻璃柱,固定相:o.23%OV—17+2.8%OV—210,Chromosorb?? W,AW一DMGS,80~100目
;Tc=200℃,TD=210℃,Ti=230℃;載氣:N2? (99.99%),60~70ml/min ;放大器高阻108Ω脈沖間隔50μs。
2.試樣的提取和凈化:
將洗凈后的蔬菜或水果切碎,并充分混合稱取l00g樣品放入搗碎缸中,加己烷200ml,丙圍50ml,快速搗碎2min。
將漿液倒入500m1離心懷中,用少許蒸餾水沖洗搗碎缸并入離心杯,在3000r/min的離心機中,離心15min,離心液用
布式漏斗過濾,用己烷沖洗離心懷,并經(jīng)布式漏斗過濾,濾液倒入1000mI分液漏斗使其分層。
將水層分到第二個1000m1分液漏斗中。己烷層用500m12%硫酸鈉振搖1min,使其靜止分層。再將水層并入第二個分
液漏斗中,加50mI己烷輕輕搖2min,靜止棄去水層。最后將兩個分液漏斗中的己烷提取液都通過裝有無水硫酸鈉的簡形
漏斗,濾入250m1三角瓶中。提取液在水浴上濃縮到20一30mI左右,用己烷定容到50ml。
從50mI容量瓶中吸出5mI提取液在氮氣流中濃縮到1m1后倒入層析柱中凈化。層析柱為0.5cm×22cm玻璃管,內(nèi)裝硅
藻土(1g硅藻土滴加0.6mI的濃硫酸混和),柱的底部放一段經(jīng)己烷洗滌過的破璃棉,硅藻土層的頂端放入少許無水硫酸
鈉。洗滌濃縮器的己烷也倒入層析柱中,然后用己烷沖洗柱,用25m1容量瓶收集。??
自25m1容量瓶中吸取一定體積的凈化溶液,經(jīng)濃縮即可進樣分析。
3.儀器調(diào)試:
(1) 將載氣調(diào)至需要量,接通主機電源;
(2) 先升檢測器溫度,再升汽化室溫度和柱溫; 打開微電流放大器“電源”開關(guān)和放大器開先,靈敏度高阻
為108Ω,衰減調(diào)到適當(dāng)位置,“基補”-“零調(diào)”開關(guān)放在‘基補”上;
(3) 打開“脈沖電源”開頭,“μs選擇”調(diào)到50μs;
(4) 打開記錄儀電源和記錄筆開關(guān),調(diào)“基補”電位器,把記錄筆調(diào)到0.8一0.95位置。
(5) 檢查基流時,“脈沖電源”開關(guān)處于關(guān)位置,記錄筆指針向零點方向移動(否則應(yīng)改變“正”“負(fù)”開關(guān)位置),
指針移動量應(yīng)在記錄儀量程范圍6內(nèi),但不應(yīng)小于0.1mV;
(6) 各恒溫器穩(wěn)定后,就可進樣分析。
4.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:
用己烷配制“α—666、β—666、γ—666、δ—666、p,p'—DDE、o,p一DDT、p,p'一DDD,p,p'—DDT各
為l00ppm(β—666要先用少量蒸苯溶解)的貯備液。 操作溶液濃度與樣品濃度相近。
5.色譜測定:
(1)用各種濃度的六六六、DDT標(biāo)準(zhǔn)溶液注入色譜儀,以確定ECD的線性范圍;
(2)進樣品溶液,根據(jù)樣品的峰高,用標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制濃度相近的操作溶液;
(3)在相同色譜條件下,依次進樣品和標(biāo)樣,記錄tR和色譜圖。
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五、數(shù)據(jù)處理 |
根據(jù)色譜圖測量蜂高,計算蔬菜和水果中的六六六、DDT的含量。
ci? / hs*Wi*K(mg/kg)=hi*cs*Ws?
式中:
ci——樣品中農(nóng)藥的濃度;
hi——扣除試劑空白后的峰高;
Ws—一標(biāo)準(zhǔn)溶液進樣邑;
Wi——樣品溶液進樣量;
hs——標(biāo)準(zhǔn)溶液峰高;
cs——標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mg/kg ),
K——濃縮系數(shù)
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六、問題討論 |
1.脈沖間隔對測定有何影響?如何選擇?
2.如何防止ECD的污染?
3.所用的注射器和玻璃器皿為什么不能用丙酮、氯仿等洗滌?
4.測定時為什么要先確定ECD的線性范圍?
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七、注意事項 |
1.使用ECD時應(yīng)采用高純度載氣,并經(jīng)凈化處理。
2.新裝填的色譜柱必須在高于使用溫度的條件下充分老化,未老化好絕對不得與ECD相連。
3.使用ECD時,如短時間停機,不要關(guān)閉載氣,只將載氣流速降低。
4.所用的注射器、玻璃儀器等,必須用烴類溶劑充分洗凈,絕對不能用丙酮、氯仿等洗滌。
5.萃取中出現(xiàn)乳化現(xiàn)象時,可采用冰凍、離心、吸濾等方法破乳化。有機相中水較多時可加少許無水硫酸鈉脫水。
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