一、凍存管的選擇
1、材質(zhì):凍存管一般是由無細(xì)胞毒性的塑料材質(zhì)制成,常見的材質(zhì)包括PP(聚丙烯)、PE(聚乙烯)和PETE(聚偏氟乙烯)。其中,PP材質(zhì)因其出色的耐化學(xué)性和溫度穩(wěn)定性,特別是能在液氮環(huán)境下(-196℃)保持穩(wěn)定,成為實(shí)驗(yàn)室的首選。
2、規(guī)格:凍存管一般有0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml等規(guī)格,具體選擇要根據(jù)凍存樣品量的大小來確定。一般來說,2.0ml凍存管被廣泛使用,但建議留出20%的空間以適應(yīng)體積變化,避免過滿或過空。
3、構(gòu)成:凍存管一般由管蓋加管體構(gòu)成,有內(nèi)旋蓋和外旋蓋之分。內(nèi)旋蓋一般用于液氮凍存生物樣本,其管口的硅膠墊增強(qiáng)了凍存管的密封性,可以有效地防止液氮滲入;外旋蓋則用于冰箱中凍存樣本,便于標(biāo)記和降低處理樣品時(shí)的污染概率。
二、凍存管的使用
1、樣本處理:從細(xì)菌純培養(yǎng)物中挑取新鮮培養(yǎng)物配成適當(dāng)?shù)木鷳乙,接種于菌種凍存管中。注意擰緊凍存管,來回顛倒幾次使細(xì)菌乳化,但不能旋搖。
2、儲(chǔ)存條件:使用凍存管儲(chǔ)存樣本時(shí),應(yīng)把凍存管放入液氮的氣相層或冰箱中保存。避免將凍存管直接放到液相之中保存,因?yàn)橐旱幸欢◣茁蕰?huì)滲入凍存管內(nèi)部,復(fù)蘇時(shí)液氮?dú)饣瘜?dǎo)致管內(nèi)外壓力不平衡,這樣極易造成凍存管的炸裂,并具有生物危害性。
3、操作安全:操作凍存管復(fù)蘇時(shí),應(yīng)全程使用安全防護(hù)設(shè)備,建議穿實(shí)驗(yàn)服、戴棉質(zhì)手套且在安全的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上進(jìn)行操作。條件允許情況下,請(qǐng)佩戴護(hù)目鏡或防護(hù)面罩。
三、注意事項(xiàng)
1、檢查凍存管:在使用前,首先要檢查凍存管是否潔凈且沒有任何破損,如有問題,應(yīng)報(bào)廢該凍存管。
2、樣本量控制:凍存的樣本量不要超過凍存管要求的最大工作體積,建議容量是最大工作體積的80%。例如2mL凍存管中液體體積應(yīng)低于1.6mL。
3、檢查密封性:在將凍存管放入液氮罐之前,請(qǐng)務(wù)必確認(rèn)蓋子已擰到位,感受有明顯阻力即可,請(qǐng)勿施力過度。選用質(zhì)量好且密閉性好的內(nèi)旋凍存管,可以有效防止液氮滲入。
4、溫度均勻:凍存管的冷凍溫度須均勻。不均勻的受凍將會(huì)導(dǎo)致冰塞的產(chǎn)生,冰塞會(huì)抑制兩側(cè)的液體溫度傳遞進(jìn)而產(chǎn)生危險(xiǎn)的高壓力并導(dǎo)致凍存管受損。
5、取出方式:從液氮罐取出后需盡快將凍存管水平放置或倒置于桌面數(shù)十秒,等液氮流出后再開啟凍存管,以防止液氮迅速汽化膨脹導(dǎo)致壓力升高而爆管。