国产黄片无马赛克在线观看_国产成人在线播放_国产综合A级片视频_亚洲va无码va亚洲

食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號
當(dāng)前位置: 首頁 » 儀器設(shè)備 » 分子生物學(xué)儀器 » 正文

ELISA實驗操作質(zhì)控全方面探討(一)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-10-16  來源:上海撫生實業(yè)有限公司 
核心提示:在ELISA的研發(fā)制備中尤為重要的就是它的指控流程,包括抗原設(shè)計及制備篩選,抗體制備,標(biāo)準(zhǔn)品的定量,檢測液的優(yōu)化,試劑盒的組裝


在ELISA的研發(fā)制備中尤為重要的就是它的指控流程,包括抗原設(shè)計及制備篩選,抗體制備,標(biāo)準(zhǔn)品的定量,檢測液的優(yōu)化,試劑盒的組裝,以及各種性能的驗證。對于科研工作者來說,要制備一個好的ELISA kit,需要具備敏感性高,特異性強,重復(fù)性好,并且其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便等。下面來看一下ELISA的質(zhì)控控制。

1. 抗原抗體選擇

ELISA檢測原理基于抗原抗體反應(yīng),其質(zhì)量影響了試劑盒的性能。對于大分子蛋白抗原,多采用雙抗體夾心法,使用優(yōu)的抗體對,且至少有一種為單抗,配對篩選最佳信噪比的包被和檢測抗體。對于抗原為多肽和小分子(或者偶聯(lián)物),多采用競爭抑制法,抗體的是經(jīng)過驗證的單克隆抗體或者多克隆抗體。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品

對于標(biāo)準(zhǔn)品定量的準(zhǔn)確性,每個公司對于定量標(biāo)準(zhǔn)和方法可能會有不同,這是企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。試劑盒使用的標(biāo)準(zhǔn)品多為重組蛋白或者單價的小分子, 定量可參考國際標(biāo)準(zhǔn)品,國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息網(wǎng)或者一些大公司,如R&D, Abcam等。標(biāo)準(zhǔn)品的定量直接會決定試劑盒最后樣本的檢測結(jié)果。

3. 天然樣本驗證分析

我們在選擇樣本時,避免使用有外源性污染的樣本,避免血樣本出現(xiàn)溶血、細菌污染,最好使用較新鮮樣本,避免反復(fù)凍融。
血清是最為常見的檢測樣本,但是大約40%的血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果;常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子RF、補體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和異嗜性抗體等其他物質(zhì)等。避免其發(fā)生的方法有:

①標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理。

②用2-C2H6OS加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。

③56℃ 30 min加熱血清使補體滅活。

在樣本檢測中,稀釋對于實驗的成功也至關(guān)重要,稀釋過度以及稀釋不足均有可能導(dǎo)致樣本的測值低。Elisa 實驗較為常見的一個現(xiàn)象就是鉤狀效應(yīng),即抗原與抗體比例不合適而導(dǎo)致假陰性的現(xiàn)象,抗原過量稱為后帶效應(yīng)。當(dāng)樣本中目標(biāo)物含量很高,而沒有進行正確的稀釋,就有可能會導(dǎo)致假陰性反應(yīng)。

編輯:songjiajie2010

 
分享:
 

 
 
推薦圖文
推薦儀器設(shè)備
點擊排行
 
 
Processed in 0.135 second(s), 18 queries, Memory 0.88 M