聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復(fù)性好、易自動化等突出優(yōu)點。

PCR反應(yīng)過程常出現(xiàn)各種問題，下面對問題做詳細匯總解答：

1. 無擴增條帶

（1）酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或運輸不當而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結(jié)果。

（2）模板含有雜質(zhì)。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的結(jié)果。

（3）變性溫度是否準確：PCR儀指示溫度與實際溫度是否相符，過高酶在前幾個循環(huán)就迅速失活；過低則模板變性不全。

（4）反應(yīng)系統(tǒng)中污染了蛋白酶及核酸酶，應(yīng)在未加Taq酶以前，將反應(yīng)體系95℃加熱5-10分鐘。

（5）引物變質(zhì)失效。人工合成的引物是否正確。是否純化，或因儲存條件不當而失活。

（6）引物錯誤。利用BLAST檢查引物特異性或重新設(shè)計引物。

（7）DNA凝膠電泳時加入陽性對照，確保不是DNA凝膠和PCR程序的問題。