分子生物學操作中會涉及一系列儀器,使用不當導致實驗失敗、減少儀器使用壽命或損壞儀器。因此在進行操作前細致地了解各種儀器的使用方法及注意事項,是使后繼實驗事半功倍的一個必要準備。
一、冷凍離心機
低溫分離技術是分子生物學研究中必不可少的手段;蚱蔚姆蛛x、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實驗中,都離不開低溫離心技術,因此低溫冷凍離心機已成為分子生物學研究中必需的重要工具。
使用方法:
1.離心機應放置在水平堅固的地板或平臺上,并力求使機器處于水平位置以免離心時造成機器震動。
2.打開電源開關,按要求裝上所需的轉頭,將預先以托盤天平平衡好的樣品放置于轉頭樣品架上(離心筒須與樣品同時平衡),關閉機蓋。
3.按功能選擇鍵,設置各項要求:溫度、速度、時間、加速度及減速度,帶電腦控制的機器還需按儲存鍵,以便記憶輸入的各項信息。
4.按啟動鍵,離心機將執(zhí)行上述參數(shù)進行運作,到預定時間自動關機。
5.待離心機完全停止轉動后打開機蓋,取出離心樣品,用柔軟干凈的布擦凈轉頭和機腔內壁,待離心機腔內溫度與室溫平衡后方可蓋上機蓋。
注意事項:
1.機體應始終處于水平位置,外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配,并要求有良好的接地線。
2.開機前應檢查轉頭安裝是否牢固,機腔有無異物掉入。
3.樣品應預先平衡,使用離心筒離心時離心筒與樣品應同時平衡。
4.揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時,應使用帶蓋的離心管,并確保液體不外漏,以免腐蝕機腔或造成事故。
5.擦拭離心機腔時動作要輕,以免損壞機腔內溫度感應器。
6.每次操作完畢應作好使用情況記錄,并定期對機器各項性能進行檢修。
7.離心過程中若發(fā)現(xiàn)異,F(xiàn)象,應立即關閉電源,報請有關技術人員檢修。
附:相對離心力與每分鐘轉速的換算
離心機的轉速,在以前實驗資料中一般以每分鐘多少轉來表示。由于離心力不僅為轉速函數(shù),亦為離心半徑的函數(shù),即轉速相同時,離心半徑越長,產生的離心力越大。因此僅以轉速表達離心力是不夠科學的,近年來主張用相對離心力(RCF)來表示比較合理,F(xiàn)在國際資料中,已改用相對離心力來表示。
二、PCR擴增儀
目前各公司提供的PCR儀操作方法各有不同,按其操作說明進行操作。
值得提出的是,在使用一定時期后,樣品孔的實際溫度與儀器顯示溫度有時會有較大差異,應當請廠商的技術支持人員校對儀器的各項性能。
三、數(shù)字式酸度計
【一】、準備工作
1.儀器應平放在符合使用環(huán)境的工作臺上,依視覺角度支起支架。
2.pH值的定位測量法:
(一)二點定位法(高精度測量方法)
(1) 連接好電極線路,將參比電極及活化滿24h以上清潔的PH電極移入第一標準緩沖液pH1中(例pH1=4.00),待儀器響應穩(wěn)定后,調節(jié)定位旋鈕至儀器顯示為“0.00”;
(2) 將電級系統(tǒng)從第1種標準液中取出,用去離子水沖洗干凈后以濾紙吸干電級表面水份,移入第2種標準液(例pH2=9.18)中,儀器響應穩(wěn)定后,調節(jié)斜率旋鈕,使儀器顯示為(△pH=pH1-pH2=9.18-4.00=5.18)此后斜率旋鈕不可再動,除非更換電極系統(tǒng);
(3) 斜率調節(jié)完成后,重新調節(jié)定位旋鈕,使儀器顯示第2種標準液的實際pH值(9.18),至此2點定位結束;
(4) 將電極從第2種標準液中取出沖洗、吸干后移入待測溶液中,儀器響應穩(wěn)定后顯示的數(shù)值即為待測溶液的pH值。
(二)一點定位法(粗略測量法)
(1) 將溫度補償旋鈕調至溶液溫度值;
(2) 向左將斜率補償旋鈕旋轉至頭;
(3) 將電級系統(tǒng)移入標準液中(一點法僅用一種標準液,如pH=4.00時),調節(jié)定位旋鈕使儀器顯示“4.00”;
(4) 取出電級沖洗吸干水分后移至待測溶液中,儀器響應穩(wěn)定后顯示的數(shù)值即為待測溶液的pH值。
(三)溫度的測量
1.將功能選擇撥至溫度檔。
2.將溫度探頭插入插孔,并將溫度探頭置于環(huán)境條件或溶液中,儀器響應穩(wěn)定后儀器顯示值即為環(huán)境條件或溶液溫度值。
(四)注意事項
1.認真做好儀器使用前準備工作。
2.儀器通電后或測量過程中出現(xiàn)顯示不穩(wěn)或亂跳現(xiàn)象,應切斷電源進行檢查,如電壓、預熱時間及電極系統(tǒng)等是否正常。
3.使用不同電極應注意排除離子的干擾,選擇好鹽橋,必要時應使用離子強度固定劑。
4.電極系統(tǒng)從第1種溶液取出移入第2種溶液之前,須用去離子水或雙蒸水清洗干凈,再用濾紙吸干表面水分,以免影響測定結果的準確性。
5.儀器應存放于干燥、清潔無腐蝕的場所,每次測量結束后應關閉電源,退出電極及溫度探頭妥善保存。玻璃電極清洗后可浸于去離子水待用(注意水面不得低于玻璃球泡),甘汞電極清潔后套上橡皮帽置于配套盒中保存,當甘汞電極內充液泄漏或不飽和及鹽橋中斷時,應及時補充飽和內充液。
6.該類儀器均采用大規(guī)模集成電路,輸入阻值較高,在對儀器內部進行任何零部件修理焊接時,應使用45W以下有良好地線的烙鐵,無接地線烙鐵應撥下電源插頭焊接。
【二】、pH(酸堿度)測量
1.將功能選擇撥至“pH”檔,調節(jié)定位旋扭,斜率補償旋鈕及溫度補償旋鈕顯示值應有相應變化。
2.通過儀器溫度檔測定標準液及待測樣品液溫度(要求兩種液體溫度保持一致,以減少測定誤差),并用溫度補償旋鈕調節(jié)至溶液實際溫度值。
四、分光光度計
不同物質對不同波長入射光的吸收程度各不相同,從而形成特征性的吸收光譜。分光光度法不僅適應于可見光區(qū),同時還可擴展至紫外光區(qū)及紅外光區(qū),因此給科研實驗帶來了極大方便。下面重點介紹分光光度計的使用及注意事項。
使用規(guī)則:
1.接通穩(wěn)壓器電源,待穩(wěn)壓器輸出電壓穩(wěn)定至200V后打開光度計電源,儀器自動進入初始化。
2.初始化約需時10 min,內容包括:①尋找零級光;②建立基線;③最后當顯示器指示××nm時,,表明儀器完成初始化程序,可進入檢測狀態(tài)。
3.按要求輸入各項參數(shù),選擇相應比色杯(玻璃或石英),將空白管、標準管及待測管依次放入比色皿架內,關上比色池蓋。
4.以空白管自動調零。
5.試樣槽依次移至樣品位置,待數(shù)據(jù)顯示穩(wěn)定后按“START/STOP”鍵,打印機自動打印所測數(shù)據(jù),重復上述步驟,直到所有樣品檢測完畢。
6.檢測結束后應及時取出比色杯,并清洗干凈放回原處,同時關上儀器電源開關及穩(wěn)壓器電源開關,做好使用情況登記。
注意事項:
1.儀器初次使用或使用較長時間(一般為一年),需檢查波長準確度,以確保檢測結果的可靠性。
2.由于長途運輸或室內搬運可能造成光源位置偏移,導致亮電流漂移增大。此時對光源位置進行調整,直至達到有關技術指標為止。若經調整校正后波長準確度、暗電源漂移及亮電流漂移三項關鍵指標仍未符合要求,則應停止使用,并及時通知有關技術人員檢修。
3.每次檢測結束后應檢查比色池內有否溶液溢出,若有溢出應隨時用濾紙吸干,以免引起測量誤差或影響儀器使用壽命。
4.儀器每次使用完畢,應于燈室內放置數(shù)袋硅膠(或其它干燥劑),以免反射鏡受潮霉變或沾污,影響儀器使用,同時蓋好防塵罩。
5.儀器室應通常保持潔凈干燥,室溫以5-35℃為宜,相對溫度不得超過85%。有條件者應于室內配備空調機及除濕機,以確保儀器性能穩(wěn)定。
6.儀器室不得存放酸、堿、揮發(fā)性或腐蝕性等物質,以免損壞儀器。
7.儀器長時間不用時,應定時通電預熱,每周1次,每次30min,以保證儀器處于良好使用狀態(tài)。
五、電泳儀
電泳技術是分子生物學研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類,自由界面電泳不需支持物,如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等,這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質作為支持物,常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等,分子生物學領域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳。所謂電泳,是指帶電粒子在電場中的運動,不同物質由于所帶電荷及分子量的不同,因此在電場中運動速度不同,根據(jù)這一特征,應用電泳法便可以對不同物質進行定性或定量分析,或將一定混合物進行組份分析或單個組份提取制備,這在臨床檢驗或實驗研究中具有極其重要的意義。電泳儀正是基于上述原理設計制造的。下面簡單介紹其使用方法及注意事項。
使用方法:
1.首先用導線將電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接,注意極性不要接反。
2.電泳儀電源開關調至關的位置,電壓旋鈕轉到最小,根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。
3.接通電源,緩緩旋轉電壓調節(jié)鈕直到達到的所需電壓為止,設定電泳終止時間,此時電泳即開始進行。
4.工作完畢后,應將各旋鈕、開關旋至零位或關閉狀態(tài),并撥出電泳插頭。
注意事項:
1.電泳儀通電進入工作狀態(tài)后,禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分,也不能到電泳槽內取放東西,如需要應先斷電,以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端,以防漏電。
2.儀器通電后,不要臨時增加或撥除輸出導線插頭,以防短路現(xiàn)象發(fā)生,雖然儀器內部附設有保險絲,但短路現(xiàn)象仍有可能導致儀器損壞。
3.由于不同介質支持物的電阻值不同,電泳時所通過的電流量也不同,其泳動速度及泳至終點所需時間也不同,故不同介質支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行。
4.在總電流不超過儀器額定電流時(最大電流范圍),可以多槽關聯(lián)使用,但要注意不能超載,否則容易影響儀器壽命。
5.某些特殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時,允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開機,但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負載再開機,否則電壓表指針將大幅度跳動,容易造成不必要的人為機器損壞。
6.使用過程中發(fā)現(xiàn)異,F(xiàn)象,如較大噪音、放電或異常氣味,須立即切斷電源,進行檢修,以免發(fā)生意外事故。
六、分析天平
分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要儀器,充分了解儀器性能及熟練掌握其使用方法,是獲得可靠分析結果的保證。分析天平的種類很多,有普通分析天平、半自動/全自動加碼電光投影阻尼分析天平及電子分析天平等。下面就電子分析天平的使用方法及注意事項做一介紹。
操作方法:
1.檢查并調整天平至水平位置。
2.事先檢查電源電壓是否匹配(必要時配置穩(wěn)壓器),按儀器要求通電預熱至所需時間。
3.預熱足夠時間后打開天平開關,天平則自動進行靈敏度及零點調節(jié)。待穩(wěn)定標志顯示后,可進行正式稱量。
4.稱量時將潔凈稱量瓶或稱量紙置于稱盤上,關上側門,輕按一下去皮鍵,天平將自動校對零點,然后逐漸加入待稱物質,直到所需重量為止。
5.被稱物質的重量是顯示屏左下角出現(xiàn)“→”標志時,顯示屏所顯示的實際數(shù)值。
6.稱量結束應及時除去稱量瓶(紙),關上側門,切斷電源,并做好使用情況登記。
注意事項:
1.天平應放置在牢固平穩(wěn)水泥臺或木臺上,室內要求清潔、干燥及較恒定的溫度,同時應避免光線直接照射到天平上。
2.稱量時應從側門取放物質,讀數(shù)時應關閉箱門以免空氣流動引起天平擺動。前門僅在檢修或清除殘留物質時使用。
3.電子分析天平若長時間不使用,則應定時通電預熱,每周一次,每次預熱2h,以確保儀器始終處于良好使用狀態(tài)。
4.天平箱內應放置吸潮劑(如硅膠),當吸潮劑吸水變色,應立即高溫烘烤更換,以確保吸濕性能。
5.揮發(fā)性、腐蝕性、強酸強堿類物質應盛于帶蓋稱量瓶內稱量,防止腐蝕天平。
6.通電前應按工作電源要求檢查電壓是否符合要求,若電源波動太大,應經交流穩(wěn)壓后再送接儀器。
7.電源應用良好接線,以消除外界干擾,使用攪拌器時,務必使攪拌器外殼與儀器接地端相連。
8.接通儀器電源,經10min預熱后,可進行測量工作。