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六通閥進(jìn)樣器是高效液相色譜系統(tǒng)中最理想的進(jìn)樣器，了解和掌握六通閥的工作原理有利于對(duì)它的使用和維護(hù)，延長(zhǎng)其使用壽命。然而很多實(shí)驗(yàn)操作人員對(duì)六通閥的工作原理模棱兩可，缺乏準(zhǔn)確的認(rèn)識(shí)，今天小編就給大家?guī)?lái)詳細(xì)的六通閥進(jìn)樣器工作原理圖文介紹。
六通閥進(jìn)樣器是由圓形密封墊（轉(zhuǎn)子）和固定底座（定子）組成。當(dāng)在充樣（Load）位置時(shí)，從進(jìn)樣孔充樣進(jìn)定量環(huán)，多余樣品從放空孔排出；轉(zhuǎn)動(dòng)至進(jìn)樣（Inject）位置時(shí)（將六通閥轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)動(dòng)60°），由泵輸送的流動(dòng)相沖洗定量環(huán)，推動(dòng)樣品入柱。六通閥進(jìn)樣器最為通用，各大HPLC儀器制造商均以此產(chǎn)品作為儀器的進(jìn)樣器。
六通閥進(jìn)樣器的工作原理主要分為兩步，分別是上樣和進(jìn)樣，如下圖所示。其中，紅色虛線(xiàn)表示定量環(huán)。首先，使用泵將流動(dòng)相從1號(hào)壓入，通過(guò)2號(hào)進(jìn)入色譜柱中，使之在色譜系統(tǒng)中形成穩(wěn)定的流路；然后樣品經(jīng)進(jìn)針口從3號(hào)注射進(jìn)定量環(huán)中，定量環(huán)中充滿(mǎn)后，多余的樣品液從5號(hào)放空孔排出，此時(shí)進(jìn)樣完成。
待樣品進(jìn)入定量環(huán)后，1號(hào)閥與6號(hào)閥接通，2號(hào)閥和3號(hào)閥接通，由泵輸入的流動(dòng)相沖洗定量環(huán)，將待測(cè)樣品沖入色譜柱中進(jìn)行分離檢測(cè)。
下面的圖示更直觀(guān)地介紹了六通閥進(jìn)樣器的工作原理。
流動(dòng)相與色譜柱構(gòu)成封閉環(huán)路，樣品從進(jìn)樣口注入，進(jìn)入定量環(huán)中，多余的以廢液形式排出。
待樣品完全進(jìn)入后，六通閥改變閥之間的連接方式，將流動(dòng)相入口與定量環(huán)接通。
流動(dòng)相通過(guò)定量環(huán)，將待測(cè)樣品沖入色譜柱中。
再次改變六通閥的連接方式，重新連回初始狀態(tài)，通過(guò)流動(dòng)相的洗脫對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行分離檢測(cè)。
外部六個(gè)接口由中間的某部件兩兩聯(lián)通，關(guān)閉時(shí)是左邊這樣，打開(kāi)時(shí)中間聯(lián)通的部件轉(zhuǎn)動(dòng)60°，變成右邊這樣。
然后再說(shuō)外部的連接。平時(shí)的整個(gè)氣路系統(tǒng)（進(jìn)氣部分氣路也可能是進(jìn)樣口，用微量進(jìn)樣器打進(jìn)去。另外這里說(shuō)的是氣相色譜，液相可能略有不同。）是下面這個(gè)樣子。其中兩個(gè)分別連進(jìn)樣口和尾氣，兩個(gè)連色譜柱，剩下的兩個(gè)互相連起來(lái)，中間定量環(huán)這段管中的樣品就是用來(lái)進(jìn)樣的。
紅色是你的樣品，直接從進(jìn)樣口進(jìn)去然后就吹出去了。藍(lán)色是色譜柱里面的載氣。
然后你點(diǎn)了一下進(jìn)樣，咔嚓，六通閥一開(kāi)，整個(gè)系統(tǒng)馬上變成下面這樣：
然后你點(diǎn)了一下進(jìn)樣，咔嚓，六通閥一開(kāi)，整個(gè)系統(tǒng)馬上變成下面這樣：
定量環(huán)改成連接在了色譜柱的兩端，于是載氣將中間殘留的一段樣品帶入色譜柱。
雖然六通閥進(jìn)樣器具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便、壽命長(zhǎng)、日常無(wú)需維修等特點(diǎn)，但正確的使用和維護(hù)將能增加使用壽命，保護(hù)周邊設(shè)備，同時(shí)增加分析準(zhǔn)確度。如使用得當(dāng)?shù)脑?huà)，六通閥進(jìn)樣器一般可連續(xù)進(jìn)樣3萬(wàn)次而無(wú)需維修，以下淺談?dòng)嘘P(guān)六通閥進(jìn)樣器的使用及保養(yǎng)事宜：
1、如果扳閥處于Load和Inject之間，便阻死了液流，壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位，過(guò)高的壓力在柱頭上引起損壞，所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動(dòng)閥，不能停留在中途。
在HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是平頭注射器。一方面，針頭外側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。
2、六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。
使用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最多為定量環(huán)體積的75％，如20μl的定量環(huán)最多進(jìn)樣15μl的樣品，并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同；使用完全裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最少為定量環(huán)體積的3至5倍，即20μl的定量環(huán)最少進(jìn)樣60至100μl的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用100μl的平頭進(jìn)樣針配合20μl滿(mǎn)環(huán)進(jìn)樣。
3、可根據(jù)進(jìn)樣體積的需要自已制作定量環(huán)，一般不要求精確計(jì)算定量環(huán)的體積。
譬如，一根名義上10μl的定量環(huán)，實(shí)際是9μl還是10μl并不重要，因?yàn)楸粶y(cè)樣品和校正樣品的進(jìn)樣體積保持一致，在計(jì)算結(jié)果時(shí)誤差都被抵消了。
4、進(jìn)樣樣品要求無(wú)微粒和能阻死針頭及進(jìn)樣閥的物質(zhì)，樣品溶液均要用0.45μm的濾膜過(guò)濾。
