凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜法主要用于高聚物的相對(duì)分子質(zhì)量分級(jí)分析以及相對(duì)分子質(zhì)量分布測試。根據(jù)分離的對(duì)象是水溶性的化合物還是有機(jī)溶劑可溶物，又可分為凝膠過濾色譜（GFC）和凝膠滲透色譜（GPC）。

根據(jù)分離的對(duì)象是水溶性的化合物還是有機(jī)溶劑可溶物，又可分為凝膠過濾色譜（GFC）和凝膠滲透色譜（GPC）。

凝膠過濾色譜一般用于分離水溶性的大分子，如多糖類化合物。凝膠的代表是葡萄糖系列，洗脫溶劑主要是水。

凝膠滲透色譜法主要用于有機(jī)溶劑中可溶的高聚物(聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)相對(duì)分子質(zhì)量分布分析及分離，常用的凝膠為交聯(lián)聚苯乙烯凝膠，洗脫溶劑為四氫呋喃等有機(jī)溶劑。

凝膠色譜不但可以用于分離測定高聚物的相對(duì)分子質(zhì)量和相對(duì)分子質(zhì)量分布，同時(shí)根據(jù)所用凝膠填料不同，可分離油溶性和水溶性物質(zhì)，分離相對(duì)分子質(zhì)量的范圍從幾百萬到100以下。

近年來，凝膠色譜也廣泛用于分離小分子化合物。化學(xué)結(jié)構(gòu)不同但相對(duì)分子質(zhì)量相近的物質(zhì)，不可能通過凝膠色譜法達(dá)到完全的分離純化的目的。

凝膠色譜法又稱體積排阻色譜法，使用水溶液流動(dòng)相的稱為凝膠過濾色譜，使用有機(jī)溶劑流動(dòng)相的稱為凝膠滲透色譜。凝膠色譜的固定相是多孔物質(zhì)，如多孔凝膠、交聯(lián)聚苯乙烯、多孔玻璃及多孔硅膠等。試樣是按照其中各組分分子大小的不同而分離的。大于填料微孔的分子，由于不能進(jìn)入填料微孔，而直接通過柱子，Z先流出柱外，在色譜圖上Z早出現(xiàn)，小于填料微孔的組分分子，可以滲透到微孔中不同的深度，相對(duì)分子質(zhì)量Z小的組分，保留時(shí)間Z長。

凝膠色譜與凝膠層析是否一樣？

基本上是一致的只是固定相存在差異。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜主要用于高聚物的相對(duì)分子質(zhì)量分級(jí)分析以及相對(duì)分子質(zhì)量分布測試。

凝膠層析又稱分子篩過濾、排阻層析，操作條件比較溫和，可在相當(dāng)廣的溫度范圍下進(jìn)行，并且對(duì)分離成分理化性質(zhì)的保持有獨(dú)到之處。

兩者的共同點(diǎn)是都不需要有機(jī)溶劑。凝膠色譜色譜一般用在HPLC等分析場合。而凝膠層析一般用在制備的時(shí)候。

凝膠凈化柱和凝膠色譜柱是一回事嗎?

原理是一回事，都是排阻色譜。 但是前者是制備柱，對(duì)大量樣品進(jìn)行分離，柱子口徑大，一般要有切割承樣的尾接裝置；后者是分析柱，主要目的是對(duì)小量樣品進(jìn)行分析，柱子直徑小，一般還有柱溫箱，對(duì)泵的穩(wěn)定性要求高，必須接檢測器。

1、Sephadex G交聯(lián)葡聚糖的商品名為Sephadex，不同規(guī)格型號(hào)的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯?dāng)?shù)為凝膠得水值的10倍。例如，G-25為每克凝膠膨脹時(shí)吸水2.5克，同樣G-200克每克干膠吸水20克。交聯(lián)葡聚糖凝膠的種類有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分部范圍。

2、Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶于水及親脂溶劑，用于分離不溶于水的物質(zhì)。交聯(lián)葡聚糖和瓊脂糖都是多糖類物質(zhì)，防止微生物的生長，在凝膠層析中十分重要，常用的抑菌劑有：

⑴疊氨鈉（NaN3）

在凝膠層析中只要用0.02%疊氮鈉已足夠防止微生物的生長，疊氮鈉易溶一水，在20℃時(shí)約為40%；它不與蛋白質(zhì)或碳水化合物相互作用，因此疊氮鈉不影響抗體活力；不會(huì)改變蛋白質(zhì)和碳水化合物的層析我特性。疊氮鈉可干擾熒光標(biāo)記蛋白質(zhì)。

⑵可樂酮[Cl3C-C(OH)(CH3)2]

在凝膠層析中使用濃度為0.01-0.02%。在微酸性溶液中它的殺菌效果Z佳，在強(qiáng)堿性溶液中或溫度高于60℃時(shí)易引起分解而失效。

⑶乙基汞代巰基水楊酸鈉

在凝膠層析中作為抑菌劑使用濃度為0.05-0. 01%。在微酸性溶液中Z為有效。重金屬離子可使乙基代巰基的物質(zhì)結(jié)合，因而包含疏基的蛋白質(zhì)可在不同程度上降低它的抑菌效果。

⑷苯基汞代鹽

在凝膠層析中使用濃度為0.001-0.01%。在微堿性溶液中抑效果Z佳，長時(shí)間放置時(shí)可與鹵素、硝酸根離子作用而產(chǎn)生沉淀；還原劑可引起此化合物分解；含疏基的物質(zhì)亦可降低或抑制它的抑菌作用。
注意事項(xiàng)