1. 目的
規(guī)范島津LC-20A型高效液相色譜儀的使用。
2. 適用范圍
適用于島津LC-20A型高效液相色譜儀的使用。
3. 適用對(duì)象
檢測(cè)中心主任，檢測(cè)主管，檢測(cè)員。
4. 操作規(guī)程
4.1 系統(tǒng)組成
泵：LC-20AT；自動(dòng)進(jìn)樣器：SIL-20A；色譜柱柱恒溫箱：CTO-20AS；檢測(cè)器：SPD-20A紫外檢測(cè)器；RF-10AXL熒光檢測(cè)器
4.2 檢測(cè)準(zhǔn)備
4.2.1制備所需的流動(dòng)相，有機(jī)溶劑用0.45μm的有機(jī)濾膜過(guò)濾，水溶液用0.45μm的水濾膜過(guò)濾，超聲脫氣20min；
4.2.2連接色譜柱：將檢測(cè)所需的色譜柱連接到柱溫箱中；
4.2.3配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液（也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制），用0.45μm針孔式濾膜過(guò)濾進(jìn)1.5mL樣品瓶中；
4.2.4檢查儀器各部件的電源線(xiàn)、數(shù)據(jù)線(xiàn)和輸液管道是否連接正常；
4.2.5將準(zhǔn)備好的流動(dòng)相，依次插入相應(yīng)的管道。
4.3啟動(dòng)儀器
4.3.1先啟動(dòng)電腦，再依次開(kāi)啟液相色譜檢測(cè)儀組件：LC-20AT → CTO-10ASvp → SIL-20A → SPD-20A；
4.3.2雙擊，啟動(dòng)“LC Solution Launcher”，單擊屏幕左側(cè)的“Operation” 標(biāo)簽，點(diǎn)擊，登陸LC solution 實(shí)時(shí)分析界面。
4.3.3單擊“LC real time”左側(cè)的按鈕。進(jìn)入System Configuration 模塊，點(diǎn)擊Reset復(fù)位，再點(diǎn)擊uto configuration自動(dòng)配置已連接儀器。
4.4進(jìn)樣準(zhǔn)備
4.4.1設(shè)置進(jìn)樣方法：在實(shí)時(shí)分析界面的參數(shù)設(shè)置版面根據(jù)樣品的需要設(shè)置合適的參數(shù)，保存為進(jìn)樣方法；
4.4.2系統(tǒng)排氣：打開(kāi)設(shè)定好的進(jìn)樣方法，點(diǎn)擊右上角工具欄中的圖標(biāo)自動(dòng)排氣10min，然后點(diǎn)擊工具欄的圖標(biāo)進(jìn)行進(jìn)樣器排氣25min；
4.4.3平衡色譜柱直到基線(xiàn)波動(dòng)在±0.05mV為止（一般為30min）；
4.4.4將準(zhǔn)備好的樣品瓶從編號(hào)1開(kāi)始依次放入105孔樣品架中。
4.5開(kāi)始進(jìn)樣
4.5.1單次進(jìn)樣：點(diǎn)擊按鈕，彈出Single Run（單次運(yùn)行）對(duì)話(huà)框，在Method file 中加載已保存的方法文件，在DATA file中鍵入數(shù)據(jù)文件名稱(chēng)，在sampler中vial#輸入需要進(jìn)樣的樣品瓶編號(hào)，在tray#輸入樣品架編號(hào)，在Injection輸入進(jìn)樣量，點(diǎn)擊OK確定，開(kāi)始單次進(jìn)樣；
4.5.2批處理：點(diǎn)擊按鈕，會(huì)顯示批進(jìn)樣列表，在Vial#輸入需要進(jìn)樣的樣品瓶編號(hào)（1、2……），在Tray#輸入樣品架編號(hào)1，在Sample Name中輸入樣品名稱(chēng)，在Sample Type 選擇“Unknown”（未知），在Injection輸入進(jìn)樣量，在Analysis Type中選擇IT QT作定量定性分析，在Method file 中加載已保存的方法文件，在DATA file中鍵入數(shù)據(jù)文件名稱(chēng)，點(diǎn)擊OK確定。然后點(diǎn)擊保存方法。點(diǎn)擊，開(kāi)始批進(jìn)樣處理。要停止批處理分析，單擊 [批處理] 助手欄中的圖標(biāo)。
4.6標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的生成：
4.6.1創(chuàng)建數(shù)據(jù)分析參數(shù)：點(diǎn)擊Data Analysis ，進(jìn)入LC solution 再解析界面，彈出DATA Analysis Parameter對(duì)話(huà)框，打開(kāi)標(biāo)準(zhǔn)樣品的液相色譜圖，點(diǎn)擊Wizard，進(jìn)入數(shù)據(jù)分析向?qū)�，設(shè)置所需的積分參數(shù)，點(diǎn)擊下一步，在需要的保留時(shí)間的峰前面的方框內(nèi)打√，點(diǎn)擊下一步，選擇標(biāo)準(zhǔn)樣品級(jí)別（# of Calib）,點(diǎn)擊下一步，再點(diǎn)擊下一步，在“Conc.”分別從低到高輸入標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度，其余參數(shù)不變，點(diǎn)擊完成。點(diǎn)擊右下角的View，點(diǎn)擊File→Save Method File As,將積分方法文件命名并保存。
4.6.2將數(shù)據(jù)分析應(yīng)用到原始方法：點(diǎn)擊Batch Processing ，將標(biāo)準(zhǔn)樣品的液相色譜圖拖動(dòng)到批量處理表中，在Sample Type 中的第一行設(shè)為“Standard:(I)”（點(diǎn)擊單元格右下角的箭頭，點(diǎn)擊Standard→Initialize Calibration），下面各行設(shè)為“Standard ” (點(diǎn)擊單元格右下角的箭頭，點(diǎn)擊Standard→Add Calibration Level）,在Method File插入克倫特羅積分方法，在Level#分別由標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度從低到高輸入水平級(jí)別（1、2……），其余參數(shù)不變，然后點(diǎn)擊批處理助手欄的開(kāi)始校準(zhǔn)；
4.6.3查看標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：點(diǎn)擊助手欄的Calibration,將顯示標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的相關(guān)數(shù)據(jù)，若不顯示，則打開(kāi)生成校準(zhǔn)曲線(xiàn)的積分方法文件。
4.7計(jì)算樣品濃度：
在LC Solution再解析版面，創(chuàng)建批處理表，將未知樣品的液相色譜圖拖至批處理表中，將Sample Type 全部設(shè)為“Unknown”，Method File全部插入保存的積分方法，Level#全部設(shè)為“0”，其余參數(shù)不變，然后點(diǎn)擊批處理助手欄的，進(jìn)行樣品進(jìn)行定量計(jì)算。雙擊樣品的結(jié)果文件將看到所測(cè)樣品在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的位置，點(diǎn)擊右下角的Compound Table View中的“Result”，濃度顯示在“Conc.”中。
4.8儀器關(guān)閉
4.8.1打開(kāi)LC Solution 實(shí)時(shí)分析界面，沖洗管路20min，沖洗完畢后，點(diǎn)擊工具欄的“Shutdown”圖標(biāo)，退出系統(tǒng)，然后按順序依次關(guān)閉液相色譜檢測(cè)儀組件電源：SPD-20A→SIL-20A→CTO-10ASvp→LC-20AT；
4.8.2關(guān)閉電腦，斷開(kāi)電源。
5注意事項(xiàng)：
5.1流動(dòng)相必須要超聲脫氣20～30min，通過(guò)適當(dāng)?shù)臑V膜過(guò)濾；
5.2水相必須要當(dāng)天制備，放置太久的水可能會(huì)長(zhǎng)菌，從而導(dǎo)致管路堵塞；
5.3進(jìn)樣器在進(jìn)樣的時(shí)候，不要打開(kāi)自動(dòng)進(jìn)樣器的門(mén)；
5.4檢測(cè)完畢后，用甲醇沖洗管道20min，以免有樣品在管路和柱子殘留；
5.5關(guān)閉儀器的時(shí)候，必須先退出系統(tǒng)，聽(tīng)到“嗶”一聲之后，才能依次關(guān)閉儀器組件的電源；
5.6若長(zhǎng)期不啟動(dòng)儀器，要將管道充滿(mǎn)甲醇，卸下柱子，封住端口，以免柱子內(nèi)的有機(jī)溶劑揮發(fā)掉而使柱子失效。