固定于濾膜上的RNA的預(yù)雜交、雜膠及淋洗等條件,與DNA雜交的相應(yīng)條件基本相同,F(xiàn)簡述如下1)用下列兩種溶液之一進(jìn)行預(yù)雜交,時(shí)間1-2小時(shí)。若于42℃進(jìn)行,應(yīng)采用。
50%甲酰胺
5xSSPE
2xDenhardt試劑
0.1%SDS
若于68℃進(jìn)行,應(yīng)采用:
6xSSC
2xDenhardt試劑
0.1%SDS
2)在預(yù)雜交液中加入變性的放射性標(biāo)記探針,如欲檢測低豐度mRNA, 所用探針的量至少為0.1μg,其放射性比活度應(yīng)大于2x108計(jì)數(shù)/(分.μg)在適宜的溫度條件下繼續(xù)溫育16-24小時(shí)。切記RNA只與雙鏈DNA中一條單鏈互補(bǔ),因此如用單鏈探針, 則必須是能與RNA互補(bǔ)的一條單鏈。
3)用1xSSC、0.1%SDS于室溫洗漠20分鐘, 隨后用0.2xSSX、 0.1%SDS于68℃洗膜3次每次20分鐘。
4)用X光片(Kodak XAR-2或與之相當(dāng)?shù)漠a(chǎn)品)進(jìn)行放射自顯影, 附加增感屏于-17℃曝光24-48小時(shí)。