一、啟動(dòng)誘導(dǎo)(一)母株的選擇。母株的選擇應(yīng)遵循三項(xiàng)基本原則:1.整個(gè)群體表現(xiàn)出該品種的典型性狀;2.群體生長(zhǎng)發(fā)育良好,沒(méi)有普遍發(fā)生特定病害浸染,特別是東亞蘭花葉病毒,齒舌蘭輪斑病毒;3.在符合上述條件的群體中選擇性狀優(yōu)異的健壯單株作母株。(二)外植體處理。選擇葉片未完全展開(kāi)的肥壯營(yíng)養(yǎng)芽(勿選花芽)為外植體,先剝?nèi)?~3片外層葉片,再手持蘭花葉芽梢,切去基部勝物及損傷、老化組織,最后逐層剝凈外層葉片,直至有小頂芽和小側(cè)芽露出。然后在超凈工作臺(tái)上先用70%的酒精浸泡外植體30秒,用無(wú)菌水沖洗后,再放入0.1%的氯化汞溶液中浸泡8分鐘左右,再用無(wú)菌水沖洗3~4次,然后在無(wú)菌接種盤(pán)上小心切下頂芽和側(cè)芽。(三)圓球莖誘導(dǎo)與馴化。將切下的頂芽和側(cè)芽插入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,基部向下,稍稍露出芽尖。然后將其置于培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng),光照強(qiáng)度1000~1500勒克斯,光照時(shí)間每天14小時(shí),培養(yǎng)溫度25℃左右。10天后芽開(kāi)始萌動(dòng),誘導(dǎo)率在85%以上。在圓球莖的誘導(dǎo)過(guò)程中,有80%左右的芽萌發(fā)后很容易長(zhǎng)成小苗。誘導(dǎo)30天后,待小苗長(zhǎng)至4厘米、基部膨大時(shí),將苗切離基部,并將膨大基部縱切成厚3~4毫米的薄片,切口向下重新放入相同的新鮮培養(yǎng)基中,30~35天從下端切口部位可長(zhǎng)出類(lèi)似愈傷組織的圓球莖,其中頂芽誘導(dǎo)率最高,誘導(dǎo)速度也最快,側(cè)芽次之。
二、繼代增殖和幼苗分化將圓球莖接種于繼代培養(yǎng)基中,然后將其置于培養(yǎng)室中培養(yǎng),培養(yǎng)溫度25℃左右,光照強(qiáng)度3000勒克斯,光照時(shí)間每天10小時(shí)。每45~50天繼代一次,增殖倍數(shù)可在10倍以上。繼代增殖初期用濃度為1.5×10-6至2×10-6的6-BA(植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑)可以較快地積累材料,隨著繼代次數(shù)的增加,特別是15代以后或變異株開(kāi)始出現(xiàn)后,只能用濃度為0.5×10-6至1.5×10-6的6-BA(植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑),并在生產(chǎn)中及時(shí)淘汰變異的圓球莖。變異的圓球莖表面只是光滑一片,沒(méi)有芽尖,不能分化出芽苗。當(dāng)圓球莖繼代到所需數(shù)量時(shí),直接將完整的圓球莖轉(zhuǎn)移到新鮮的增殖培養(yǎng)基中,不要縱切分割,也不要切除芽尖,讓圓球莖表面的芽尖直接分化萌發(fā)為小苗。
三、生根與煉苗當(dāng)苗長(zhǎng)至3厘米高、有2~3片葉時(shí),即可將苗小心切離基部,轉(zhuǎn)入壯苗生根培養(yǎng)基中,然后將其置于培養(yǎng)室中培養(yǎng),培養(yǎng)溫度25℃~28℃,光照強(qiáng)度5000~6000勒克斯,光照時(shí)間每天12小時(shí),20天左右開(kāi)始生根,35天可進(jìn)行煉苗。大花蕙蘭瓶苗移栽前先移入遮陽(yáng)棚內(nèi),在自然散射光下(7000~8000勒克斯),光照時(shí)間每天8~12小時(shí)的環(huán)境中放置15~20天,可明顯提高瓶苗的質(zhì)量和栽植成活率。當(dāng)瓶苗葉色濃綠、葉片堅(jiān)挺、植株健壯時(shí),即可出瓶移栽。