利用人工誘變或自然變異等,通過(guò)細(xì)胞染色體組加倍獲得多倍體育種材料,用以選育作物新品種的技術(shù)。在細(xì)胞中具有3個(gè)或3個(gè)以上染色體組的生物體稱(chēng)多倍體。由同一物種所形成的多倍體稱(chēng)為同源多倍體。經(jīng)不同物種間雜交、加倍后形成的多倍體稱(chēng)為異源多倍體。由于染色體組數(shù)目不同,多倍體可分為三倍體、四倍體、五倍體、六倍體、八倍體等。在蔬菜育種中,多倍體育種不僅用于選育豐產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)新品種,獲得無(wú)子果實(shí)和創(chuàng)造新物種,還可作為克服遠(yuǎn)緣雜交不育和雜種不稔性的有效手段。
簡(jiǎn)史:1916年溫克勒(H.Winkler)在番茄與龍葵的嫁接試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),在愈傷組織長(zhǎng)成的枝條中有番茄的四倍體。自1937年布萊克斯利(A.F.B.lakes lee)和埃弗里(A.G.Avery)利用秋水仙素誘發(fā)曼陀羅四倍體獲得成功以后,各國(guó)相繼展開(kāi)人工誘發(fā)多倍體的試驗(yàn)研究。1947年,木原均、西山市三發(fā)表《利用三倍體無(wú)子西瓜之研究》,報(bào)導(dǎo)了三倍體無(wú)子西瓜選育成功。1959年,西貞夫等利用四倍體結(jié)球甘藍(lán)和四倍體白菜雜交,成功地育成雙二倍體新種——“白藍(lán)”。目前,已有1000多種植的獲得了多倍體。中國(guó)于20世紀(jì)50年代開(kāi)始多倍體育種的研究。70年代以來(lái),蔬菜多倍體育種取得許多重要進(jìn)展,已培育出三倍體、四倍體西瓜,四倍體甜瓜以及蘿卜、番茄、茄子、蘆筍、辣椒和黃瓜等蔬菜多倍體材料。
誘發(fā)多倍體的方法:主要有物理法和化學(xué)法兩種。物理的方法包括各種射線(xiàn)、異常溫度、高速離心力、高溫處理等;化學(xué)法是用秋水仙素、水合三氯乙醛、笑氣、富民隆等化學(xué)藥劑處理。被廣泛條用的主要是秋水仙素,成功率最高,經(jīng)秋水仙素處理后,正處于有絲分裂的植物細(xì)胞,其紡錘體的產(chǎn)生受到抑制,這樣染色體雖然進(jìn)行了分裂,但細(xì)胞并未分開(kāi),因此,細(xì)胞內(nèi)的染色體數(shù)成倍增加。此后,細(xì)胞再進(jìn)行分裂就形成了多倍體。還有,如在配子形成過(guò)程中,細(xì)胞減數(shù)分裂受到秋水仙素抑制后,配子變?yōu)槎缎。這種不進(jìn)行減數(shù)分裂的雌雄配子結(jié)合后,也產(chǎn)生多倍體。前者是體細(xì)胞分生組織染色體加倍的起源方式,而后者則是配子的染色體未減數(shù)的起源方式。
秋水仙素引變多倍體的方法主要有以下幾種:①浸泡法。又可分為種子處理和植物幼小枝條先端及側(cè)芽處理兩種。種子浸光處理是把干種子放進(jìn)小瓶里或鋪有濾紙的培養(yǎng)器中,然后注入0.01-1.0%的秋水仙素水溶液。置于室溫或保持一定溫度的條件下,經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后,用水沖凈利播種;另外,用剛萌發(fā)的種子,經(jīng)秋水仙素處理效果也很好。幼小枝條先端的處理,是利用幼嫩而易彎曲的枝條,使其先端直接浸泡在藥液內(nèi)。②滴下法。在作物幼小的頂芽或腋芽上,用滴管0.1-0.4%秋水仙素溶液。每天一至數(shù)次,連續(xù)滴2-3天。為防止溶液流失,可用藥液棉球覆蓋在幼芽上使之密接,或直接滴在覆蓋在芽的棉球上。此法的優(yōu)點(diǎn)是不致使芽受藥害而死亡,且可隨時(shí)調(diào)整處理的時(shí)間,成功率較高。③羊毛脂法,用0.1-1.0%的秋水向素溶液和無(wú)水羊毛脂混合的軟膏,在幼芽上涂抹。處理時(shí)間,因作物種類(lèi)和秋水仙素濃度不同而異。秋水仙素常用濃度為0.2%。處理時(shí)間,短者幾分鐘,長(zhǎng)則10天左右。
鑒定誘變后的蔬菜是否為多倍體,可觀(guān)察其形態(tài)解剖學(xué)特性及結(jié)實(shí)情況。如在苗期調(diào)查子葉及葉片是否肥厚,幼芽胚莖是否肥大,在成株時(shí)期觀(guān)察葉片氣孔和花粉粒的大小等。凡較對(duì)照大者多有可能為多倍體變異,此為間接鑒定。更可靠的是進(jìn)行染色體直接鑒定,即取植物根尖細(xì)胞、嫩葉細(xì)胞或花粉母細(xì)胞制片選適當(dāng)?shù)娜旧珓,如丙?鐵-洋紅-水合三氯醛(PICCH)等進(jìn)行染色,用涂抹法或壓片法觀(guān)察誘變材料,確定其染色體的倍數(shù)。具體育種方法按一般育種程序進(jìn)行。