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轉(zhuǎn)染方法
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原 理
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應(yīng) 用
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特 點(diǎn)
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二乙氨乙基(DEAE)-右旋糖酐法
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帶正電的DEAE-葡聚糖(dextran) 與帶負(fù)電的核酸磷酸骨架相互作用形成復(fù)合物,通過細(xì)胞內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞
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瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
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相對(duì)簡便,結(jié)果可重復(fù),但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時(shí)需去除血清
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磷酸鈣法
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磷酸鈣-DNA 復(fù)合物吸附于細(xì)胞膜,被細(xì)胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,
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瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
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操作簡便,但重復(fù)性差,不適用于原代細(xì)胞及某些培養(yǎng)細(xì)胞
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陽離子脂質(zhì)體法
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帶正電的脂質(zhì)體與帶負(fù)電的核酸磷酸骨架形成復(fù)合物,被細(xì)胞內(nèi)吞
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穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,
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適用于所有細(xì)胞,轉(zhuǎn)染效率高,重復(fù)性好,但轉(zhuǎn)染時(shí)需去除血清,轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大
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非脂質(zhì)體脂類法
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內(nèi)含多種脂質(zhì)成分,與DNA 結(jié)合后轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)
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瞬時(shí)轉(zhuǎn)染穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
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適用于所有細(xì)胞,包括許多原代培養(yǎng)細(xì)胞;轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞毒性小,轉(zhuǎn)染時(shí)可以不去除血清
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逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)法
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通過感染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中
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穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
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可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,如原代細(xì)胞、體內(nèi)細(xì)胞等。但攜帶基因不能太大,操作復(fù)雜,耗時(shí),需考慮安全因素。
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腺病毒介導(dǎo)法
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通過感染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中
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瞬時(shí)轉(zhuǎn)染特定宿主細(xì)胞
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可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,需考慮安全因素
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電穿孔法
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高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位,DNA 通過膜上形成的小孔導(dǎo)入
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穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
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,適用于所有細(xì)胞,但細(xì)胞致死率高,DNA 和細(xì)胞用量大,需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件
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基因槍法將
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DNA 用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置射入細(xì)胞,DNA 在胞內(nèi)逐步釋放、表達(dá)
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瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
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可用于人的表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞系及原代細(xì)胞
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顯微注射法
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通過顯微操作將DNA 直接注入靶細(xì)胞核穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,
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瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
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轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限,多用于基因工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞
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