1.在10~20 ml 預雜交液中68℃溫育膜2h。
2.若使用雙鏈探針,在100℃下加熱32P標記的雙鏈DNA 5 min,使之變性,然后迅速移至冰水中冷卻。
3.把變性的或單鏈放射性標記的探針直接加到預雜交液中,在合適的溫度下繼續(xù)溫育12~16h。
4.雜交后,將膜從塑料袋中取出,在室溫下迅速轉移到含有100~200ml 1×SSC,0.1%SDS的塑料盒內(nèi),將盒蓋好,置于水平振蕩器上,溫和振蕩10 min。
5.將膜轉移至另一含有100~200ml預熱至68℃、含0.1%SDS的0.5×SSC的塑料盒中。68℃下溫和振蕩10min。
6.重復步驟5,再洗滌至少2次,使68℃下共洗滌3次。
7.在印跡紙上晾干膜,然后讓膜于-70℃下在含增感屏的暗盒內(nèi)對X線片(Kodar XAR-5或相應的膠片)放射自顯影24~48h。此外,也可通過磷圖像系統(tǒng)掃描得到膜上的圖像。