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mRNA差別顯示技術(shù)實(shí)驗(yàn)流程

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06

對(duì)照組的總RNA提取

mRNA完整性鑒定

實(shí)驗(yàn)組的總RNA提取

mRNA完整性鑒定

錨定引物逆轉(zhuǎn)錄成cDNA

錨定引物逆轉(zhuǎn)錄成cDNA

采用隨機(jī)引物和逆轉(zhuǎn)錄引物進(jìn)行選擇性PCR擴(kuò)增

采用隨機(jī)引物和逆轉(zhuǎn)錄引物進(jìn)行選擇性PCR擴(kuò)增

擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳分析

ß

差異性條帶的回收與第二次擴(kuò)增

ß

Northern雜交,Southern雜交再次確定差異性條帶的真實(shí)性

ß

差異性條帶的克隆、測(cè)序、分析,DNA及氨基酸序列聯(lián)機(jī)檢索

ß

以差異性條帶為探針克隆出基因組文庫(kù)中的基因

序列及cDNA文庫(kù)中的全長(zhǎng)cDNA序列

ß

基因功能的鑒定:

knock out

dominant negative mutation

③原核系統(tǒng)或真核系統(tǒng)中的表達(dá)翻譯?贵w的制

備,細(xì)胞內(nèi)的定位,抗體抑活等等。

one hybrid判斷出該基因的“啟動(dòng)”基因。

two hybrid判斷出該基因的產(chǎn)物的作用途徑。

這里以CLONTECH公司生產(chǎn)的DeltaTM Differential Display Kit為例,介紹具體的實(shí)驗(yàn)步驟。該試劑盒中含有10種任意引物和9Oligo(dT)引物。

 

 

 
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