用多對引物同時擴(kuò)增幾條DNA片段的方法稱為復(fù)合PCR(Multiplex PCR)。這一方法最初是由Chanberlain 等檢測人的基因發(fā)展而來。Bej等隨之發(fā)展了對環(huán)境樣品中不同屬細(xì)菌相關(guān)基因序列同時PCR擴(kuò)增的檢測方法。兩種不同的軍團(tuán)菌(legionella)基因,一為特異嗜肺L基因(mip),另一種為L-5SrRNA基因,通過引物搖擺(staggered)添加進(jìn)行復(fù)合PCR。首先mip引物PCR擴(kuò)增7個循環(huán),然后加入5SrRNA引物PCR擴(kuò)增38個循環(huán)。加入不同量的LacZ和LacB基因引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增可以檢測大腸桿菌和與人類糞便污染有關(guān)的細(xì)菌包括E.coli大腸菌、腸源致病沙門氏菌和志賀氏菌。
在復(fù)合PCR中,所有引物Ta值應(yīng)相近。如果兩對引物Tq值差異超過±℃10%,會使擴(kuò)增產(chǎn)物的量明顯不同,其中一種擴(kuò)增產(chǎn)物或目的DNA很難觀察到。另外,靶DNA的長度也應(yīng)相近,差別大時短片的靶DNA會優(yōu)先擴(kuò)增,因此,會產(chǎn)生不同產(chǎn)量的擴(kuò)增產(chǎn)物,為此,須采用DNA搖擺擴(kuò)增或加入不等量的引物方法進(jìn)行解決。
在復(fù)合PCR中,所有引物Ta值應(yīng)相近。如果兩對引物Tq值差異超過±℃10%,會使擴(kuò)增產(chǎn)物的量明顯不同,其中一種擴(kuò)增產(chǎn)物或目的DNA很難觀察到。另外,靶DNA的長度也應(yīng)相近,差別大時短片的靶DNA會優(yōu)先擴(kuò)增,因此,會產(chǎn)生不同產(chǎn)量的擴(kuò)增產(chǎn)物,為此,須采用DNA搖擺擴(kuò)增或加入不等量的引物方法進(jìn)行解決。