1989年,Horton等人提出了SOE法(Gene splicing by over lap extension),即通 過(guò)復(fù)制時(shí)DNA鏈的交錯(cuò)延伸不實(shí)現(xiàn)基因拼接,分四步進(jìn)行。
。1)引物設(shè)計(jì):引物a和d是常規(guī)引物;b的左半段為常規(guī)引物,右半段為基因Ⅱ的引 物序列;c同理;則b和c的部分堿基可互補(bǔ)配對(duì)。
(2)基因I、Ⅱ分別擴(kuò)增,產(chǎn)物相應(yīng)為片段A、B和C、D。
(3)兩種產(chǎn)物混合,經(jīng)變性及退火處理,A鏈和D鏈部分堿基互補(bǔ)配對(duì),成雜交鏈。
。4)在DNApolymeraseI作用下,A和D鏈互為引物和模板,合成出A'D'鏈,即為基因I 和基因Ⅱ的接接產(chǎn)物。若在引物中引入突變的堿基序列,則在接接產(chǎn)物中,將按預(yù)先 設(shè)計(jì)要求出現(xiàn)定點(diǎn)突變。