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固相夾心雜交

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01
Dunn等最早介紹了夾心雜交類型,Ranki等又作了進一步的改進,夾心雜交法比直接濾膜雜交法有兩個主要的優(yōu)點:(1)樣品不需固定,對粗制樣品能做出可靠的檢測;(2)用夾心雜交法比直接濾膜雜交法特異性強,因為只有兩個雜交物都雜交才能產(chǎn)生可檢測的信號。
固相夾心法雜交需要兩個靠近而又互相重疊的探針,一個做固相吸附探針,另一個作標記檢測探針,樣品基因組內(nèi)核酸只有使這兩個探針緊密相連才能形成夾心結(jié)構(gòu),需要注意的是兩探針必須分別亞克隆進入兩個分離的非同源載體內(nèi),以避免產(chǎn)生高的本底信號。
夾心雜交法可用濾膜和小珠固定吸附探針,使用小珠可更好地進行標準化試驗和更容易對小量樣品進行操作。Dahlen等利用微孔板進行夾心雜交,可同時進行大量樣品檢測,他們先吸附DNA探針加到凹板中,然后用紫外線照射使其固定到塑料板上,用微孔板進行夾心雜交還可直接用于PCR技術(shù)。應用光敏生物素標記探針,檢測PCR產(chǎn)物的敏感性和用32P標記探針(3×108cpm/μg)作16h放射自顯影的Southern雜交的敏感性一樣。用微孔板雜交的其它優(yōu)點還有可同時操作多份樣品,加樣、漂洗和讀結(jié)果等步驟可以自動化。
 

 

 
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