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DNA純系化(DNA克隆化) DNA cloning

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-10-13

  將特定的DNA片斷結(jié)合于自我增殖的載體上,再納入寄主細(xì)胞使DNA片斷增殖,這一過程稱為DNA純系化。如果以特定的基因為對象時,則稱為基因純系化(基因克隆化gene cloning)。大腸菌K12株及其質(zhì);蚴删w的EK系是其代表性的系統(tǒng)。在從各種生物所具有的巨大數(shù)目的基因中選出特定的基因DNA,一般多用下述方法:

  把從某種生物中提取的全部DNA,通過限制性內(nèi)切酶等使之成為片斷,對此片斷不分級而直接進(jìn)行克隆化的實驗稱為霰彈槍式實驗。即此時先將各DNA片斷無差別地進(jìn)行克隆化,然后將所要求的片斷選取出來,除根據(jù)其基因表現(xiàn)型進(jìn)行選擇和測定外,還可使用集落雜交法(或噬菌斑雜交法)。與此相反,作為目標(biāo)的基因從特異出現(xiàn)的組織中將信使RNAm-RNR)分提,通過反轉(zhuǎn)錄酶合成與mRNA互補的DNAcDNA),將此DNA與載體結(jié)合而進(jìn)行克隆化,這是最常用的方法。在這種情況下,可直接獲得所需要的遺傳信息的DNA克隆,但在cDNA由于基因內(nèi)區(qū)部分缺失,而與原來基因在結(jié)構(gòu)上不同。不過cDNA的這種性質(zhì),根據(jù)實驗?zāi)康亩嗑哂欣c,同時可利用被克隆化的cDNA從基因組DNA中找出原來的基因而再進(jìn)行克隆化也是可能的。此外,對巳知氨基酸序列的蛋白質(zhì),認(rèn)為在遺傳密碼表中有其相反對應(yīng)的DNA堿基序列,據(jù)此也可被用于人工合成的DNA克隆化的方法中。

 

 

 

 
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