本要點(diǎn)適用于供治療的體內(nèi)診斷用的利用雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體，適用于在人體內(nèi)應(yīng)用的利用重復(fù)DNA技術(shù)制備的基因工程抗體

一、雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體
（一）雜交瘤細(xì)胞
1．親本細(xì)胞
（1）骨髓瘤細(xì)胞
SP2/0或其他適宜的骨髓瘤細(xì)胞系。應(yīng)為不合成或不分泌免疫球蛋白鏈型，具有符合骨髓瘤細(xì)胞的染色體特征，并有明確的來(lái)源歷史及符合要求的保存條件。
（2）免疫親代細(xì)胞
經(jīng)抗原免疫的鼠脾B淋巴細(xì)胞或外周血B淋巴細(xì)胞。
應(yīng)有明確的免疫原來(lái)源、性質(zhì)及動(dòng)物種系，免疫原詳細(xì)的制備過(guò)程。
適宜的免疫方案及免疫淋巴細(xì)胞制備的方法。

2．細(xì)胞融合與克隆化
采用適宜的方法進(jìn)行融合、篩選及克隆化。

3．雜交瘤細(xì)胞檢定
（1）抗體分泌穩(wěn)定性
連續(xù)克隆化后抗體陽(yáng)性率達(dá)100%，經(jīng)體外連續(xù)傳代3個(gè)月以上和反復(fù)凍存、復(fù)蘇，細(xì)胞系能保持穩(wěn)定分泌特異性抗體。
（2）細(xì)胞核學(xué)特征
檢查細(xì)胞分裂中期染色體，應(yīng)符合雜交瘤細(xì)胞特征。

4．鼠源病毒檢查
按附錄要求檢測(cè)鼠源病毒。

5．支原體檢查
按現(xiàn)行《中國(guó)藥典》生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。

6．無(wú)菌試驗(yàn)
按現(xiàn)行《中國(guó)藥典》生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。

（二）單克隆抗體的檢定
1．免疫球蛋白類及亞類
用免疫雙擴(kuò)散法或其他適宜的方法測(cè)定。

2．親和力
用可靠、準(zhǔn)確的方法測(cè)定單克隆抗體（以下簡(jiǎn)稱為單抗）的親和常數(shù)或相對(duì)親和力。一般情況下，對(duì)于免疫原為可溶性的單抗，測(cè)其親和常數(shù)，對(duì)于免疫原為顆粒性抗原的單抗，測(cè)其相對(duì)親和力。

3．特異性
測(cè)定單抗對(duì)靶抗原的特異性；對(duì)多株單抗識(shí)別的抗原決定簇進(jìn)行相關(guān)性分析。

4．交叉反應(yīng)
按附錄要求。
免疫組織化學(xué)法測(cè)定單抗與人體組織交叉反應(yīng)，用冰凍及石蠟包埋的各種正常臟器組織測(cè)定。來(lái)源于腫瘤相關(guān)抗原的單抗應(yīng)進(jìn)行與各種腫瘤組織的交叉反應(yīng)試驗(yàn)。

5．效價(jià)測(cè)定
用適宜方法測(cè)定。

（三）其他原材料
1．細(xì)胞培養(yǎng)用小牛血清
支原體檢測(cè)應(yīng)為陰性。經(jīng)小量試驗(yàn)適于雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。

2．培養(yǎng)液
應(yīng)有培養(yǎng)液來(lái)源，質(zhì)量指標(biāo)。

3．化學(xué)試劑
規(guī)格應(yīng)達(dá)到分析純以上。

二、基因工程抗體
參考《人用重組DNA制品質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》和本指導(dǎo)原則中的有關(guān)要求進(jìn)行。

三、細(xì)胞庫(kù)的建立
應(yīng)分別建立原始細(xì)胞庫(kù)、主細(xì)胞庫(kù)、工作細(xì)胞庫(kù)的三級(jí)管理細(xì)胞庫(kù)，一般情況下主細(xì)胞庫(kù)來(lái)自原始細(xì)胞庫(kù)、工作細(xì)胞庫(kù)來(lái)自主細(xì)胞庫(kù)。各級(jí)細(xì)胞庫(kù)應(yīng)有詳細(xì)的制備過(guò)程、檢定情況及管理規(guī)定等。

四、單抗生產(chǎn)
包括用小鼠腹水法和細(xì)胞培養(yǎng)法制備。
（一）小鼠腹水法
1．小鼠
制備腹水必需使用合格的SPF級(jí)BACB/C小鼠或BACB/C和瑞士小鼠雜交子一代。

2．動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施應(yīng)有相關(guān)部門(mén)頒發(fā)的二級(jí)以上合格證。

3．腹水制備
取適量擴(kuò)增培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞注射小鼠腹腔制備腹水，小鼠可以預(yù)先用液體石蠟或降植烷等處理。

（二）細(xì)胞培養(yǎng)法
可以采用發(fā)酵罐培養(yǎng)，亦可用細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)收集上清液制備單克隆抗體。培養(yǎng)基用無(wú)牛血清或低牛血清培養(yǎng)基，不能用-內(nèi)酰胺類抗生素。

（三）抗體純化
可采用鹽析法、分子篩層析、離子交換親和層析等適宜的方法。
1．盡可能選用一些不引起免疫球蛋白聚合、變性等的純化方法及條件。

2．應(yīng)驗(yàn)證所用的純化方法能去除可能存在的非目標(biāo)產(chǎn)物污染，如不需要的免疫球蛋白分子、宿主DNA、用于生產(chǎn)腹水抗體的刺激物、內(nèi)毒素、其它熱原質(zhì)、培養(yǎng)液成分或?qū)游鲋�析出成分等�?/p>

3．應(yīng)驗(yàn)證所用的純化方法能有效的去除/滅活病毒。

4．連續(xù)產(chǎn)生的各批產(chǎn)品必須符合質(zhì)檢要求，批間具有良好的重復(fù)性。

5．純化后處理
必要時(shí)對(duì)純化后抗體采用適宜方法進(jìn)行處理。

（四）半成品、成品制備

五、檢定
包括原液（小鼠腹水、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、純化抗體）、半成品及成品的檢定等。
（一）物理化學(xué)檢測(cè)
1．外觀
液體制劑應(yīng)為接近無(wú)色微帶乳光的澄清液體，不應(yīng)含有異物、渾濁或搖不散的沉淀。

2．pH值
電位法測(cè)定

3．蛋白質(zhì)含量的測(cè)定
用Lowry法或其它適宜的方法測(cè)定。

4．純度測(cè)定
（1）電泳法
用還原和非還原條件SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法。掃描后免疫球蛋白含量應(yīng)達(dá)到95%以上，二聚體≤10%。
（2）HPLC法
純度應(yīng)≥95%。
（3）多聚體測(cè)定
用FPLC或HPLC法，用適宜的分子篩層析，多聚體應(yīng)≤10%。

5．DNA含量測(cè)定
用DNA分子雜交法。每一劑量殘余鼠骨髓DNA含量不高于100pg。

6．水分
產(chǎn)品如為凍干制品，應(yīng)進(jìn)行殘余水分測(cè)定，其含量應(yīng)≤3%。

（二）生物學(xué)檢定
1．活性及效價(jià)測(cè)定
用適宜方法進(jìn)行。

2．鼠源病毒檢定
同上鼠源病毒檢查。

3．無(wú)菌試驗(yàn)
同上無(wú)菌試驗(yàn)。

4．支原體檢定
同上支原體檢定。

5．安全試驗(yàn)
用小白鼠和豚鼠進(jìn)行試驗(yàn)。

6．熱原質(zhì)試驗(yàn)
按照現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》生物制品熱原質(zhì)試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。采用家兔法時(shí)，家兔注射劑量=（人用劑量/50）*20*家兔體重（kg）。也可用鱟試劑法，1mg/mL蛋白濃度不應(yīng)檢測(cè)出有凝集活性。

7．異常毒性實(shí)驗(yàn)

（三）非免疫球蛋白雜質(zhì)分析
包括來(lái)源于細(xì)胞基質(zhì)、培養(yǎng)基和下游工藝的相關(guān)雜質(zhì)，采用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)和方法進(jìn)行分析檢測(cè)。

六、經(jīng)修飾的單克隆抗體
為了提高單克隆抗體在治療和體內(nèi)診斷中的作用，常用單抗與毒素、藥物、放射性核素或其它物質(zhì)偶連形成免疫結(jié)合物，或在同一段多胎鏈包含非免疫球蛋白和免疫球蛋白序列的嵌合重組蛋白來(lái)獲得。研究者除對(duì)前面提到的有關(guān)未偶連單克隆抗體（未修飾單克隆抗體）的要求外，還應(yīng)提供下列內(nèi)容：

（一）免疫結(jié)合物的構(gòu)建
應(yīng)提供構(gòu)建免疫結(jié)合物所用試劑和過(guò)程的詳細(xì)資料，包括：
1．描述與單克隆抗體連接的成分如：毒素、藥物、酶及細(xì)胞因子，包括：所有成分的來(lái)源、結(jié)構(gòu)、制法、純度及特征。

2．制備免疫結(jié)合物所用化學(xué)試劑的描述，如連接劑和螯合劑。這些資料應(yīng)該包括試劑來(lái)源、制備方法，以及合成或純化時(shí)殘留雜質(zhì)的測(cè)定等內(nèi)容。還應(yīng)提供合成反應(yīng)途徑的圖解，以及與免疫結(jié)合物中所用化學(xué)試劑毒性相關(guān)資料。

3．在確定成品的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)應(yīng)首先確定該原料與抗體的平均結(jié)合率及每個(gè)抗體被結(jié)合部分的數(shù)量，并揭示免疫球蛋白置換數(shù)量、效力和穩(wěn)定性間的關(guān)系。

4．用重組DNA技術(shù)制備的制品（如來(lái)源于轉(zhuǎn)染細(xì)胞系或微生物培養(yǎng)基，嵌合的、易形的，互補(bǔ)決定區(qū)［CDR］接合的及單鏈Fv抗體，以及重組免疫結(jié)合物）應(yīng)提供構(gòu)建和置備過(guò)程的全部資料。重組免疫結(jié)合物的穩(wěn)定性應(yīng)認(rèn)真研究。因聚合物形成構(gòu)形改變或變性而減弱了特異免疫反應(yīng)性（如通過(guò)重組Fvs形成"雙抗"）可能導(dǎo)致藥代動(dòng)力學(xué)的改變和/或與非靶組織結(jié)合。

（二）免疫結(jié)合物的純度
1．應(yīng)采取特殊措施保證抗體盡可能無(wú)外源免疫球蛋白或非免疫球蛋白污染，因這些污染物質(zhì)在構(gòu)建免疫結(jié)合物過(guò)程中，能與核素、毒素或藥物發(fā)生反應(yīng)。

2．應(yīng)規(guī)定最終產(chǎn)品中游離抗體或游離組分的限量。活性中間體應(yīng)被滅活或去除。

（三）免疫結(jié)合物的免疫反應(yīng)性，效力及穩(wěn)定性
毒素或藥物偶聯(lián)至抗體上會(huì)改變其中任一成分的活性。
1．應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒�；評(píng)估偶聯(lián)前后的免疫反應(yīng)性。

2．免疫結(jié)合物非免疫球蛋白成分的活性應(yīng)在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候用效力試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行評(píng)估（例如，毒素、細(xì)胞因子或酶等），用于造影的放射性免疫結(jié)合物除外。

3．免疫結(jié)合物構(gòu)建后，應(yīng)確定免疫反應(yīng)性變化的百分率限值，并作為產(chǎn)品規(guī)格的組成部分。

4．應(yīng)通過(guò)在合并的人血清中37℃無(wú)菌條件下孵育，來(lái)檢測(cè)免疫結(jié)合物在體外的穩(wěn)定性。假如所用抗凝劑不會(huì)影響免疫結(jié)合物的穩(wěn)定性，血漿可以用來(lái)代替血清。經(jīng)過(guò)規(guī)定間隔時(shí)間分析樣品中完整免疫結(jié)合物及分解產(chǎn)物的濃度。應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明評(píng)估產(chǎn)品的穩(wěn)定性的條件及所用陰、陽(yáng)對(duì)照。

（四）與放射性核素偶聯(lián)單克隆抗體的特殊問(wèn)題
放免結(jié)合物應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)化的、嚴(yán)格控制并經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法制備。應(yīng)建立檢測(cè)游離同位素、結(jié)合單克隆抗體、標(biāo)記的非免疫球蛋白物質(zhì)的放射性百分率的方法。
1．放射性標(biāo)記單克隆抗體的初始研究用新藥申報(bào)包含連續(xù)3次放射標(biāo)記試生產(chǎn)的分析結(jié)果，應(yīng)證明所制備的產(chǎn)品未改變免疫特異性、無(wú)菌、無(wú)熱原質(zhì)。放射性標(biāo)記試生產(chǎn)應(yīng)由在研究中對(duì)單克隆抗體進(jìn)行放射性標(biāo)記及使用試劑的同一組人員進(jìn)行。

2．制備免疫結(jié)合物時(shí)應(yīng)使用放射性藥品及同位素并應(yīng)提供其無(wú)菌及無(wú)熱原質(zhì)的分析證書(shū)及橫向參比的信涵。

3．在標(biāo)記試生產(chǎn)過(guò)程中，應(yīng)測(cè)定最終產(chǎn)品中共價(jià)結(jié)合的和游離的同位素的濃度，以及標(biāo)記試劑及其分解產(chǎn)物的殘留水平。

4．應(yīng)描述給每一個(gè)病人應(yīng)用前后進(jìn)行的質(zhì)控試驗(yàn)。

5．適當(dāng)?shù)臅r(shí)候，應(yīng)檢測(cè)免疫結(jié)合物形成膠體的情況，并對(duì)其進(jìn)行限定。

6．有關(guān)單抗制備中放射性標(biāo)記物的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)參考國(guó)家關(guān)于放射性藥品規(guī)定。

七、產(chǎn)品穩(wěn)定性
產(chǎn)品穩(wěn)定性應(yīng)滿足臨床方案制定的要求。加速穩(wěn)定性試驗(yàn)資料可作為產(chǎn)品審批及標(biāo)定用，但不能代替實(shí)際的穩(wěn)定性資料。

（一）應(yīng)制定穩(wěn)定性檢定規(guī)劃，包括在規(guī)定效期全過(guò)程中，每間隔一定時(shí)間進(jìn)行制品的物理化學(xué)完整性試驗(yàn)（如斷裂或聚合），效力試驗(yàn)，無(wú)菌試驗(yàn)，以及水分、pH和防腐劑的穩(wěn)定性測(cè)定。

（二）確保制品生物活性的穩(wěn)定性試驗(yàn)（例如定量體外效率試驗(yàn)）應(yīng)包括廠內(nèi)參比品。如可能在試驗(yàn)的全過(guò)程中只使用一批試驗(yàn)抗原（如：純化的抗原、細(xì)胞或組織）。應(yīng)用定量效力試驗(yàn)使對(duì)生物活性進(jìn)行有意義的比較成為可能。

（三）加速穩(wěn)定性試驗(yàn)，既將制品儲(chǔ)存在溫度高于常規(guī)儲(chǔ)存溫度后的穩(wěn)定性試驗(yàn)，可能有助于鑒定及建立穩(wěn)定性指示試驗(yàn)。表示穩(wěn)定性的特定參數(shù)應(yīng)通過(guò)對(duì)每一批制品用趨向分析方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

八、臨床前研究
由于生產(chǎn)條件或配方的改變可引起制品生物活性的明顯變化。因此，建議在臨床前研究中所使用的單抗應(yīng)與臨床試驗(yàn)中擬使用的單抗的生產(chǎn)工藝一致。

（一）交叉反應(yīng)性試驗(yàn)
當(dāng)相同或相關(guān)抗原決定簇在人的非預(yù)定的細(xì)胞或靶組織表達(dá)時(shí)，可觀察到抗體與它們結(jié)合。非靶組織結(jié)合可能具有嚴(yán)重后果，特別是使用藥理活性抗體或細(xì)胞毒性免疫結(jié)合物時(shí)。因此，一般在Ⅰ期臨床試驗(yàn)前應(yīng)經(jīng)過(guò)用人組織或細(xì)胞進(jìn)行交叉反應(yīng)性或非靶組織結(jié)合的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。對(duì)于雙特異性抗體，除檢測(cè)雙特異性產(chǎn)品外，還應(yīng)對(duì)每株親本抗體進(jìn)行逐個(gè)評(píng)估。

1．檢測(cè)交叉反應(yīng)性的體外試驗(yàn)
目前，用人細(xì)胞或組織進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)及免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)，應(yīng)使用有效的并被確認(rèn)的新技術(shù)（參照1．2．4）。

2．測(cè)定交叉反應(yīng)性的體內(nèi)試驗(yàn)
當(dāng)有適當(dāng)模型時(shí)，單克隆抗體與非靶人組織的交叉反應(yīng)性應(yīng)在動(dòng)物中進(jìn)行一次綜合的體內(nèi)試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果，特別是對(duì)具有溶細(xì)胞性的免疫結(jié)合物或具有ADCC活性的抗體，通常要求進(jìn)行更廣泛的臨床前試驗(yàn)，包括用一種以上動(dòng)物超劑量及重復(fù)劑量進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)。設(shè)計(jì)臨床試驗(yàn)時(shí)應(yīng)考慮對(duì)非靶組織的定位。

（二）臨床前藥理學(xué)和毒性試驗(yàn)
1．設(shè)計(jì)單克隆抗體臨床前安全試驗(yàn)是為了預(yù)測(cè)在人體中可能的毒性
評(píng)估在人體中潛在不良反應(yīng)副作用的可能性和嚴(yán)重程度，并可能確定安全初始劑量和逐步提高劑量。有關(guān)單克隆抗體的臨床前試驗(yàn)，包括免疫原性、穩(wěn)定性、組織交叉反應(yīng)性和效應(yīng)功能。

2．動(dòng)物毒理學(xué)研究
當(dāng)設(shè)計(jì)單克隆抗體的毒理學(xué)試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)考慮如下：
（1）若被試樣品為未偶聯(lián)抗體，且無(wú)合適的動(dòng)物模型或無(wú)攜帶相關(guān)抗原的動(dòng)物，且與人組織交叉反應(yīng)性試驗(yàn)明顯陰性，則毒理學(xué)試驗(yàn)不是必須的。

（2）動(dòng)物體內(nèi)相關(guān)抗原的性質(zhì)與人體內(nèi)相關(guān)抗原的生物學(xué)分布、功能及結(jié)構(gòu)應(yīng)具有可比性。但是，對(duì)于所用的動(dòng)物模型，不必要求對(duì)單克隆抗體的抗原密度或親和力絕對(duì)相等。例如，結(jié)合力差異可通過(guò)增加劑量或服藥頻率來(lái)彌補(bǔ)。應(yīng)鑒定動(dòng)物和人之間存在的抗原數(shù)，單克隆抗體的抗原親和力或?qū)�單克隆抗體結(jié)合的細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)等方面存在的差異。這可以更精確的推斷人用的安全初始劑量,并評(píng)估安全范圍。

（3）對(duì)單克隆抗體通常不要求進(jìn)行常規(guī)誘變性的評(píng)估。

（4）擬給育齡婦女反復(fù)或長(zhǎng)期使用的產(chǎn)品，應(yīng)該用適當(dāng)?shù)膭?dòng)物模型進(jìn)行反復(fù)的深入的研究包括致畸試驗(yàn)。

3．藥效學(xué)和動(dòng)物藥代動(dòng)力學(xué)
（1）當(dāng)有動(dòng)物模型時(shí)，則應(yīng)盡可能證明藥理學(xué)效應(yīng)與劑量的依賴性，以及有效劑量的范圍，可以更好地預(yù)測(cè)治療指數(shù)；當(dāng)無(wú)適合動(dòng)物模型時(shí)，則應(yīng)盡可能以人外周血、組織器官等進(jìn)行體外藥效學(xué)研究。當(dāng)有動(dòng)物模型時(shí)，藥代動(dòng)力學(xué)的有關(guān)資料（生物學(xué)分布，半衰期等）可以從動(dòng)物模型中得到；當(dāng)無(wú)適合動(dòng)物模型時(shí)，動(dòng)物藥代動(dòng)力學(xué)可以考慮不做，加強(qiáng)臨床試驗(yàn)時(shí)藥代動(dòng)力學(xué)方面的監(jiān)控。

（2）下列方面可以指導(dǎo)藥代動(dòng)力學(xué)幾藥效學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物種類的選擇：
①最好選擇與人有交叉反應(yīng)或相同靶抗原的動(dòng)物模型來(lái)進(jìn)行試驗(yàn)。對(duì)于僅抗人而未在動(dòng)物模型中表達(dá)的人抗原或外源抗原（細(xì)菌，病毒等）的未偶聯(lián)單克隆抗體，可以不必用缺乏靶抗原的動(dòng)物做試驗(yàn)。
②當(dāng)有抗原結(jié)合資料表明靈長(zhǎng)類為最相關(guān)種屬時(shí)，則對(duì)未偶聯(lián)的單克隆抗體的試驗(yàn)采用非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物是適宜的。
③應(yīng)對(duì)使用正常嚙齒類動(dòng)物和鼠異源移植模型精確預(yù)測(cè)單克隆抗體在人體的藥代動(dòng)力學(xué)行為的可能性進(jìn)行嚴(yán)格評(píng)估。異源移植模型對(duì)評(píng)估單克隆抗體與人體內(nèi)腫瘤結(jié)合的能力更有意義。

（3）鼠源抗體對(duì)于小鼠為非免疫原性物質(zhì)，但在人體內(nèi)具免疫原性，這就使得在鼠內(nèi)所得的重復(fù)劑量結(jié)果難以推至擬在人體內(nèi)使用的重復(fù)劑量。使用完全人源的、嵌合的或"人源化的"單克隆抗體將出現(xiàn)相應(yīng)的問(wèn)題，在這種情況下用嚙齒類動(dòng)物進(jìn)行重復(fù)劑量的研究意義不大。

4．用免疫結(jié)合物進(jìn)行的臨床體內(nèi)研究
（1）應(yīng)在體內(nèi)試驗(yàn)免疫結(jié)合物的穩(wěn)定性
①應(yīng)測(cè)定免疫結(jié)合物中每個(gè)組分在動(dòng)物體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布，并且與未偶聯(lián)抗體的分布相比較。
②不同組分的靶組織和他們能引起的潛在的毒性應(yīng)被證實(shí)。

（2）由于免疫結(jié)合物可能被降解或作用位點(diǎn)的活性不是單克隆抗體與靶抗原結(jié)合的結(jié)果，應(yīng)對(duì)含有放射性核素、毒素或藥物的免疫結(jié)合物進(jìn)行動(dòng)物毒性實(shí)驗(yàn)，盡管該種動(dòng)物不存在靶抗原。根據(jù)免疫結(jié)合物組分的性質(zhì)和其偶聯(lián)的穩(wěn)定性，對(duì)組分分別進(jìn)行試驗(yàn)是有道理的。應(yīng)充分描述每個(gè)組分的毒性情況、副反應(yīng)的發(fā)生和嚴(yán)重程度。所得結(jié)果應(yīng)與結(jié)合物穩(wěn)定性試驗(yàn)密切相關(guān)。如可能，應(yīng)用具有相關(guān)靶抗原或疾病模型動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行免疫結(jié)合物試驗(yàn)，如果不存在靶抗原陽(yáng)性動(dòng)物就在嚙齒類動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行。游離毒素或核素的毒性試驗(yàn)可在不同類動(dòng)物中進(jìn)行。

（3）對(duì)于放射性核素的免疫結(jié)合物：
①動(dòng)物生物分布的資料可被用于對(duì)初始人用劑量的評(píng)估。
②如可能，表達(dá)靶抗原的動(dòng)物模型更有可能發(fā)現(xiàn)抗原"減少"或帶有在生物分布和/或毒性方面表現(xiàn)意外抗原的組織。
③異源移植模型可以組織定位和抗原非特異放射性免疫結(jié)合物分布問(wèn)題，但對(duì)確定一般組織交叉反應(yīng)范圍沒(méi)有幫助。
④應(yīng)研究適宜的動(dòng)物數(shù)量以用一個(gè)可接受的變異系數(shù)（通常小于20%）對(duì)放射性劑量進(jìn)行評(píng)估。
⑤對(duì)于使用放射性總量的新陳代謝和測(cè)定從早到晚清除期時(shí)間點(diǎn)的適當(dāng)數(shù)值應(yīng)有完整計(jì)算。
⑥放射性免疫結(jié)合物應(yīng)通過(guò)在血清或血漿中孵育檢測(cè)體外穩(wěn)定性。應(yīng)建立方法來(lái)評(píng)估游離表位，偶聯(lián)單克隆抗體，標(biāo)記的非單克隆抗體三種中每成分存在的放射性百分比。
說(shuō)明：對(duì)局部外用和制備體外診斷試劑盒單克隆抗體要求參照上述相關(guān)部分執(zhí)行，但其生產(chǎn)條件、小鼠清潔級(jí)別、抗體純度和安全試驗(yàn)可根據(jù)實(shí)際需要降低或減少要求。

附錄：鼠源性病毒檢測(cè)
1．被檢病毒
人用鼠源性單抗制品中可能含有潛在污染的病毒見(jiàn)下表。
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組 病毒 受影響動(dòng)物
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Ⅱ 出血熱病毒 大鼠，小鼠
淋巴細(xì)胞脈絡(luò)從腦膜炎病毒（LCMV） 大鼠
3型呼腸孤病毒（REO） 大鼠，小鼠
大鼠輪狀病毒 大鼠
仙臺(tái)病毒 大鼠，小鼠
Ⅱ 脫腳病病毒 小鼠
KITHAM氏大鼠病毒（KRV） 大鼠
小鼠腺病毒（MAV） 小鼠
小鼠肺炎病毒（PVM） 小鼠
逆轉(zhuǎn)錄病毒 大鼠，小鼠
TOOLAN病毒（HI） 大鼠
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前五種病毒屬Ⅰ組，為能夠感染人與靈長(zhǎng)類動(dòng)物的病毒，后六種屬Ⅱ組，為目前尚無(wú)跡象表明感染人，但對(duì)人類具有潛在危險(xiǎn)性，能在體外培養(yǎng)的人和猿、猴源性細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制，這些病毒應(yīng)作為重點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。

2．樣品
包括細(xì)胞株、腹水、動(dòng)物血清、單抗半成品和成品等，用適宜方法預(yù)處理。

3．試驗(yàn)方法
包括細(xì)胞試驗(yàn)、動(dòng)物抗體產(chǎn)生試驗(yàn)、雞胚感染試驗(yàn)等。
3．1細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞及培養(yǎng)上清液分別接種人2BS、Vero細(xì)胞，培養(yǎng)，傳兩代后制片，用間接免疫熒光法檢測(cè)病毒抗原。
3．2動(dòng)物抗體產(chǎn)生試驗(yàn)
樣品接種出生24小時(shí)以內(nèi)乳鼠10只（i．m）；15~20g成年小鼠20只（i．mti．p：10只接種樣品，10只作為對(duì)照）；小鼠20只（i．c：10只接種樣品，10只作為對(duì)照）。觀察4周存活率應(yīng)在80%以上，用ELISA或其他適宜的方法檢測(cè)血清中病毒抗體。

3．3雞胚感染試驗(yàn)
應(yīng)用雞胚接種進(jìn)行檢查，可用9~11天齡的雞胚，將樣品注射于10個(gè)雞胚的絨毛尿囊膜、尿囊腔及卵黃囊中。接種后雞胚至少在5天后才能進(jìn)行檢查。并用豚鼠、雞或其它禽類的紅細(xì)胞檢查尿囊液中是否含有血凝素。

4．檢測(cè)范圍?
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樣品 細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物抗體產(chǎn)生試驗(yàn) 雞胚感染試驗(yàn) 備注
原始細(xì)胞庫(kù) - 每批檢查
主細(xì)胞庫(kù) - 每批檢查
工作細(xì)胞庫(kù) - 每批檢查
鼠群 - - 定期抽查
腹水 - - 每批檢查
細(xì)胞培養(yǎng)法制備 每批檢查
單抗的上清液
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