基本原理

由于SPA能與IgG的Fc片段非特異性結(jié)合，同時不影響Fab片段的活性,所以當(dāng)帶有SPA的金黃色葡萄球菌與抗體混合，再加入適量的相應(yīng)抗原，結(jié)果會使出現(xiàn)的凝集反應(yīng)更易于觀察。它對顆粒性抗原和可溶性抗原抗體反應(yīng)都有協(xié)同凝集作用。此方法簡便、快速、便于推廣應(yīng)用。

材料與試劑

1．金黃色葡萄球菌

(1) SPA陽性株：NO.1800株(國內(nèi)分離株)比Cowan株(國際標(biāo)準(zhǔn)株)更為優(yōu)越，在加熱過程中，不易出現(xiàn)自家凝集，更適用于協(xié)同凝集實驗。

(2) SPA陰性株：Wood 46株。

2．試用菌種 炭疽桿菌、枯草桿菌及蠟樣芽胞桿菌。

3．炭疽免疫血清。

4．正常免疫血清。

5．培養(yǎng)基。

6．0.01Mol/L pH 7.4 PBS液，0.1%NaN3的0.01Mol/L pH7.4 PBS液，

0.5%福爾馬林的0.01Mol/L pH 7.4 PBS液。

7．生理鹽水。

8．磁力攪拌器等。

操作方法

1．將N0.1800株接種瓊脂斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)20h~24h。

2．以少量生理鹽水洗下菌體，4 000r/min離心20min。

3．將沉淀的菌體用0.01mol/L pH7.4 PBS液洗3次，然后用含0.5%福爾馬林的0.01mol/L pH 7.4PBS液制成10%(V/V)懸液，置室溫下3h。

4．將懸液56℃水浴30min，離心，用PBS液洗2次。最后用含0.1%NaN3的PBS液制成10%懸液，即為SPA菌穩(wěn)定液，置4℃冰箱備用。

5．將SPA懸液1ml(如從冰箱拿出，可再用PBS液洗一次)，加滅活的炭疽陽性血清0.1ml，37℃30min。

6．4 000r/min離心20min，去上清，沉淀用PBS液洗2次，最后用含0.1%NaN3的PBS液制成10%懸液，共10ml，此即為SPA菌的凝集用試劑。

7．取干凈載玻片，用接種環(huán)取1滴已標(biāo)記的SPA凝集用試劑，然后再從瓊脂斜面上取少量待試細菌，充分混合，2min內(nèi)紀(jì)錄結(jié)果。

8．對照組的設(shè)置

(1) SPA陰性菌標(biāo)記免疫血清對照。

(2) SPA陽性菌標(biāo)記正常血清對照。

(3) SPA穩(wěn)定液與炭疽桿菌凝集對照。

(4) 抗炭疽血清與炭疽菌凝集對照。

(5) 其它芽胞桿菌凝集試驗對照。

結(jié)果判定

強度以“＋~＋＋＋＋”表示：

＋＋＋＋： 2min內(nèi)，菌體凝集成大顆粒，液體透明。

＋＋＋ ： 2min內(nèi)，菌體凝集成較大顆粒，液體透明。

＋＋ ： 2min內(nèi)，菌體凝集成較小顆粒，液體輕度透明。

＋ ： 2min菌體部分凝集成細小顆粒,液體混濁。

－ ：2min內(nèi)，無凝集現(xiàn)象，或2min以上才能出現(xiàn)細小顆粒者。