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免疫中和反應(yīng)技術(shù)(Neutralization test technique):固定血清稀

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

病毒或毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合后,失去對易感動物的致病力,謂之中和試驗。本試驗主要用于:從待檢血清中檢出抗體,或從病料中檢出病毒,從而診斷病毒性傳染。用抗毒素血清檢查材料中的毒素或鑒定細(xì)菌的毒素類型;測定抗病毒血清或抗毒素效價;新分離病毒的鑒定和分型,中和試驗不僅可在易感的實驗動物體內(nèi)進行,亦可在細(xì)胞培養(yǎng)上或雞胚上進行。試驗方法主要有簡單定性試驗、固定血清稀釋病毒法、固定病毒稀釋血清法、空斑減少法等。

本法多將病毒作10倍遞增稀釋,分置2列試管,第一列加正常血清(對照組),第二列加待檢血清(試驗組)。混合后,置37作用1h,將各管混合液分別接種選定的試驗動物,每一稀釋度用35只動物。接種后,逐日觀察,并記錄其死亡數(shù),觀察結(jié)束后,計算LD50和中和指數(shù),本法適用于大量檢樣的檢測。

表 固定血清稀釋病毒法術(shù)式

混合前

病毒稀釋

2×10-1

2×10-2

2×10-3

2×10-4

2×10-5

2×10-6

2×10-7

-

正常

血清

稀釋病毒

-

-

-

1.0

1.0

1.0

1.0

-

正常血清

-

-

-

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

對照組

稀釋液

-

-

-

-

-

-

-

1.0

待檢血清

稀釋病毒

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

-

待檢血清

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

中和組

稀釋液

-

-

-

-

-

-

-

1.0

混合后病

毒稀釋

10-1

10-2

10-3

10-4

10-5

10-6

10-7

-

表 固定血清稀釋病毒法中和試驗(例)

病毒稀釋

10-1

10-2

10-3

10-4

10-5

10-6

10-7

LD502

中和指數(shù)

正常血清對照組

-

-

-

441

34

14

04

10-5.5

103.31.995

待檢血清中和組

44

24

14

04

04

04

04

10-2.2

注:[1]分母為接種數(shù),分子為死亡數(shù);

2LD50計算見實例。

中和指數(shù)=中和組LD50/對照組LD50=10-2.2/10-5.5=103.3

3.3反對數(shù)是1.995,故中和指數(shù)103.31.995。也就是說該待檢血清中和病毒的能力為正常血清的1.995倍。本法多用以檢出待檢血清中的中和抗體,對病毒而言,通常中和指數(shù)大于50者判為陽性,1049為可疑,小于10為陰性。

 

 

 

 
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