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western blotting的一些細(xì)節(jié)-2

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27
上樣緩沖液的問題:
上樣緩沖液配多少濃度雙較合適,這個問題是很重要的。因為這里涉及到上樣量的問題。
如果上樣孔只能上樣30ul。而樣本中蛋白較少,要上樣25ul才有可能做出蛋白條帶。這個時候就要用到高倍上樣緩沖液。以下是6倍緩沖液的配方:
6*SDS凝膠上樣緩沖液:
300mM/L tris-HCl(pH6.8)
600mM/L DTT
12%SDS
0.6%溴酚藍(lán)
60% 甘油
此外,提高上樣量還有一個辦法。就是在上樣緩沖液和樣品混合煮的時候開蓋,這樣可以使一部分水份蒸發(fā),從而提高上樣量。

 

 

 

 
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