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碘同位素標記單克隆抗體

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

同位素標記是一種重要的抗體標記技術(shù),牨977Yalow等在放射免疫測定法所作突出貢獻而獲得醫(yī)學和生理學諾貝爾獎。McAb標記同位素后除應(yīng)用于放射免疫測定外,還可用于競爭結(jié)合試驗、體內(nèi)腫瘤定位等。

  () 原理

  氯胺桾即對甲苯碘氯胺鈉,在水溶液中生成次氯酸,為一種溫和氧化劑,當加入到有蛋白質(zhì)和碘的弱堿水溶液中,可將I2氧化為I+并結(jié)合到氨基酸上。如標記條件溫和,標記后的McAb仍具有良好的結(jié)合活性,通過放射性同位素強度的測定可反映相應(yīng)抗原的含量。

  () 方法

      在細胞凍存管內(nèi)加入純化的McAb100μg100μl,
      再加入10μl 0.05M磷酸緩沖液
      再加入10μl(1mCi)125I

          ↓

     加入10μl氯胺-T(5mgml溶于0.05M磷酸鹽緩沖液),孵育時間不超過30

             ↓

      加入100μl偏重亞硫酸鈉(1.2mgml溶于0.05M磷酸緩沖液)

             ↓

      加入200μl KI溶液(少許結(jié)晶KI溶于0.05M磷酸緩沖液+4%牛血清白蛋白)

             ↓

      用PD10(Sephadex G25)除去游離125I
      用4BSA PBS洗脫

             ↓

      分部收集,0.5ml/管

  每管取5μl進行γ計數(shù),計算標記抗體的比活性和標記率

           結(jié)合于McAb125I放射性強度(cpm)
    標記率()=───────────────────
              總放射性強度(cpm)

                結(jié)合于某一管McAb上的放射性強度
    比活性(μCi/μgMcAb)=────────────────
                    某一管McAb總量

  () 試劑器材

  1. 純化后的McAb

  2. 0.05M磷酸緩沖液,氯胺桾,偏重亞硫酸鈉,KIBSA

  3. 125I

  4. 有通風裝置的超凈臺,γ計數(shù)儀

  5. PD10(Sephadex G25)

  () 注意事項

  1. 嚴防同位素污染,工作人員必須穿著工作衣,戴口罩、帽子、手套。必須在嚴密的通風櫥或通風超凈臺中操作。操作前后對實驗室環(huán)境進行監(jiān)測。所用125I和標記物應(yīng)妥善保管。

  2. 如標記細胞因子、激素等,應(yīng)選用更溫和的標記方法,使保持更好的生物學活性。

 

 

 

 
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