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放射免疫分析順序飽和加樣程序

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

  1.基本原理先將標準物或血樣品與抗血清混勻,免疫反應6~24h,使抗原與抗體充分結合,甚至達到平衡,然后再加入標記抗原,與抗體反應12~24h,最后分離B與F,這稱為順序飽和分析法。
  應用順序飽和加樣,可以提高測定方法的靈敏度。Utiger在做人促甲狀腺激素(TSH)放射免疫分析時,將標記物延至第2天加入,發(fā)現(xiàn)其靈敏度增加兩倍。如果縮短最后的溫育時間,仍可取得滿意的結果。所以一般認為,在順序飽和加樣中,第1次溫育時間可以長,而第2次溫育時間要短,這樣可以提高靈敏度。但也有相反的意見,認為順序飽和加樣,是使用過量抗體,會使靈敏度受到一定影響。如果使用抗體不過量,溫育時間縮短,在抗原和抗體結合未達到平衡飽和時就加入標記物,這樣既不影響加靈敏度,反而比較穩(wěn)定,甚至可提高靈敏度。

  2.加樣程序 以人血漿精氨酸加壓素RIA測定程序為例(直接測定)。
 。1)加樣(單位μl;總反應體積600μl)
 。2)孵育:4℃,24h。
 。3)分離B與F。
  無肽血漿,用于血漿的直接測定。其制備方法為:在電磁攪拌下,抽取2%加膜活性炭溶液5ml,共兩管,離心、去上清。血漿5ml,倒入上述活性炭管中,加蓋,充分振蕩10min,離心,上清倒入上述另一活性炭管中,振蕩10min,再離心,取上清,即無肽血漿。血漿中的生物活性物質(zhì)被活性炭吸附而去除。

 

 

 

 

 
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