(一)蒸汽接種法
準(zhǔn)備:先把接種操作室打掃干凈,保持潮濕清潔。準(zhǔn)備水壺或鋁鍋1只,煤球爐或電爐1只,接種臺(tái)1張,接種針或大鑷子一把。蒸料滅菌桶:用鐵皮做成比鋁鍋口徑小一點(diǎn)的圓桶,桶底放鐵篩架,桶內(nèi)裝菌袋、瓶。上邊口用塑料紙或木蓋封口。
操作:將煤球爐或電爐放在操作臺(tái)旁,再將水壺或鋁鍋放在爐子上面,鍋內(nèi)裝適量的水,接種工具先放在鍋內(nèi)煮沸消毒。接種時(shí),關(guān)好門窗,洗凈雙手,戴上口罩。將菌種塊直接通過(guò)蒸汽放入栽培種的培養(yǎng)料上。在蒸汽上接種,既舒服又方便,且接種質(zhì)量可靠。因?yàn)檎羝谏厦暗倪^(guò)程中產(chǎn)生一股沖力,把水壺或鍋上的空氣排開,蒸汽不斷產(chǎn)生,就形成鍋上一片無(wú)菌區(qū)。由于菌種得到蒸汽的濕潤(rùn),比在酒精燈上接的種恢復(fù)得更快,污染也少。另外蒸汽接種不使用化學(xué)藥品,可避免在接種時(shí)藥品對(duì)入體的毒害。
(二)代替瓊脂培養(yǎng)基
1.綠豆粉培養(yǎng)基:將新鮮、干燥、不霉變的豆粉隊(duì)放入鍋內(nèi)煮沸調(diào)團(tuán)狀,裝入試管或三角瓶?jī)?nèi),塞好棉塞,用 牛皮紙或報(bào)紙包扎好試管上部,成捆放于高壓鍋內(nèi),用12公斤/厘米2壓力滅菌半小時(shí),然后慢慢放汽,取出試管凝固成斜面即成。
2.麥粒種:將小麥粒用溫水浸泡2小時(shí),撈出放入竹篩內(nèi),4個(gè)小時(shí)燒一次清水,約24小時(shí)左右,麥粒就萌發(fā) 小芽約1厘米。這時(shí)再放火鍋內(nèi)煮沸半小時(shí),取出用涼水冷卻后,加入石膏、干馬糞使之成散粒,然后分裝試管、三角瓶、蘑菇瓶、雜酒瓶,裝量按常規(guī)。塞好棉塞進(jìn)行滅菌,15磅壓力滅菌1小時(shí)。然后接種。 采用此法可節(jié)約大量瓊脂;瘜W(xué)藥品。
(三)于實(shí)體組織分離簡(jiǎn)易方法
在無(wú)菌環(huán)境中,直接切取菇體未形成孢子組織塊,進(jìn)行 培養(yǎng)即稱簡(jiǎn)易分離技術(shù)。
方法:在第一批菇中,選取具有該品種特性的、發(fā)育正常、菌蓋肥厚、朵大、無(wú)病蟲害的子實(shí)體作種菇。在蒸汽上用手把子實(shí)體一分為二,用消毒過(guò)的小刀在萌蓋和菌柄交界處切取一小塊菌肉,移放在斜面培養(yǎng)基中央。分離完后標(biāo)上菌種導(dǎo)和分離時(shí)間,然后培養(yǎng)。
還可將于實(shí)體菌柄與菌蓋交界處的菌肉,挑一塊直接放 入滅過(guò)菌的原種瓶,培養(yǎng)即可。這種菌種也可直接用于栽培或擴(kuò)接。
(四)以菇種菇的方法
以菇種菇,就是將子實(shí)體直接當(dāng)菌種栽培。方法是:把培養(yǎng)料按常規(guī)栽培要求拌勻后,壓塊,在料塊表面放些子實(shí)體(子實(shí)體要干凈無(wú)污染),子實(shí)體上撒一層培養(yǎng)料,蓋上塑料紙即可。注意子實(shí)體放入后,不能重壓。在20℃以下的低溫培養(yǎng)。
(五)"U"型音提純菌種
常規(guī)提純銀耳伴生菌——香灰菌絲,用試管培養(yǎng)基反復(fù)提純,手續(xù)繁多且不易提純,我們采用玻璃"口"型管提純香灰菌絲,不用瓊脂培養(yǎng)基,就可得到純的香灰菌絲,其方法:取1—2厘米口徑的玻璃"U"型管數(shù)支,裝上木屑培養(yǎng)基,兩端用塑料紙包扎嚴(yán)(耐高壓塑料紙),滅菌后,在接種箱內(nèi),用接種針挑香灰菌絲前端白色處一點(diǎn),接于"U"管一端,經(jīng)培養(yǎng),菌絲長(zhǎng)至另一端后,及時(shí)挑取一點(diǎn)放入又一"U"型管內(nèi),這樣反復(fù)進(jìn)行提純,可獲得純菌絲。
(六)幾種簡(jiǎn)易母種培養(yǎng)基的制作
1.缺少土豆時(shí)可用米湯或小麥煮水代替
(1)米湯培養(yǎng)基
煮米飯時(shí)在鍋中多加些水;將米湯濾在沒(méi)有油污的干凈容器內(nèi),取1000毫升,倒在小鍋中,加熱煮沸,加入瓊脂20克,攪拌使之溶化,再加入葡萄糖(如無(wú)葡萄糖,加白糖亦可)20克,蛋白胨5克(沒(méi)有可不加),維生素B1片(10毫克),待藥物全部溶解后,趁熱倒入漏斗內(nèi),分裝試管,裝量為試管長(zhǎng)度的 1/4,經(jīng) 15磅壓力滅菌30分鐘,取出;擺成斜面。平菇菌絲在米湯培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度比在PDA培養(yǎng)基上快1倍左右。
(2)小麥汁培養(yǎng)基
取小麥5斤;淘洗干凈,置鍋中,加水煮沸,煮至小麥膨脹而不裂開,中間無(wú)白心為度,過(guò)濾后取澄清液1000毫升(不足量可加清水補(bǔ)充),在濾液中加入瓊脂20克,葡萄糖或白糖20克,制備方法同米湯培養(yǎng)基,過(guò)濾后的小麥粒加入0.5%碳酸粉和1.5%的石膏粉,可用于制作原種培養(yǎng)基,在小麥汁培養(yǎng)基上先后接種平菇、鳳尾菇、香菇、木耳、金針菇,其長(zhǎng)勢(shì)均比在PDA培養(yǎng)基強(qiáng)。
2.缺少瓊脂時(shí)可用玉米;蛎罪堊髋囵B(yǎng)基
(l)玉米粒培養(yǎng)基
將玉米顆粒用冷水泡脹,沖成綠豆粒大小碎塊或?qū)⒛塾衩琢G兴椋b入試管,裝量為試管的 1/3~1/2,用竹筷稍壓緊,然后塞上棉塞,置高壓鍋內(nèi),15磅壓力滅菌45分鐘,取出冷卻后即可作為組織分離或轉(zhuǎn)接菌種的培養(yǎng)基,將組織塊或菌絲接入其中,25℃左右下培養(yǎng),7~10天菌絲長(zhǎng)滿,菌絲體潔白濃密,擴(kuò)接成原種,長(zhǎng)勢(shì)亦好。
(2)米飯培養(yǎng)基
將已濾去米湯即將入瓶的米飯分裝入試管內(nèi),稍稍壓緊,使米粒成形,塞上棉塞。滅菌、接種,培養(yǎng)同玉米粒培養(yǎng)基。