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細胞表面抗原染色的組織樣本制備方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
1.將組織(10-20mm)切成1-2mm的碎片,用緩沖液或培養(yǎng)液浸濕。
2.用1ml緩沖液或培養(yǎng)液預洗Medicon 二遍。
3.將組織和1ml緩沖液或培養(yǎng)液放入到Medicon中,蓋上蓋子,將Medicon 插入到Medimachine中。
4.降解組織。降解組織的時間長短依賴于組織類型。(參見降解時間表)。
5.用注射器通過 Medicon上的注射器接口將上清吸去。
6.用1ml緩沖液或培養(yǎng)液沖洗Medicon三遍。
7.選擇適當大小孔徑的Filcon 濾器過濾細胞懸液。(50-mmFilcon 適用 于大 多數(shù)組織,如:淋巴結、腫瘤組織、皮膚組織)
8.用1ml緩沖液或培養(yǎng)液沖洗Filcon三遍。
9.250g離心細胞懸液5分鐘。
10.用適當?shù)木彌_液或培養(yǎng)液重懸細胞沉淀。
11.若需要,重復3-10步驟。
12.調(diào)節(jié)細胞濃度至5×105-1×106/ml。
13.用適當濃度的抗體在2-80C與100ml細胞懸液孵育15-30分鐘。
14.加2ml 冷的緩沖液或培養(yǎng)液(2-80C), 250g離心5分鐘。
15.用緩沖液或培養(yǎng)液重懸細胞沉淀。
16.分析樣本。
 

 

 
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