Ⅰ、樣品準備 準備以下一種或幾種樣品
A、組織單細胞懸浮液(如淋巴腺、脾、骨髓、胎盤細胞)
B、組織培養(yǎng)細胞
C、Ficoll-hypaque分離的單核細胞
Ⅱ、反應體系-DNA低滲緩沖液
檸檬酸三鈉 0.25g
Triton-X 100 0.75ml
Propidium iodide 0.025g
核糖核酸酶 0.005g
蒸餾水 250ml
我們將該DNA低滲溶液于密閉瓶子中存放數(shù)月后并無發(fā)現(xiàn)有任何染色活性的丟失
Ⅲ、染色
1、 每一個管子中放入1×106個細胞;
2、 樣品離心后盡可能完全地移去上清液,并且不要打碎沉淀塊;
3、 入1ml的DNA低滲染色緩沖液至沉淀中,并混勻;
4、 樣品于4℃下避光30分鐘或最長不超過1個小時以備流式細胞儀分析。
注意:延長在低滲緩沖液的曝光時間會引起樣品碎片的增加。