一、兔肝細(xì)胞線粒體的活體染色
(一)原理
線粒體是細(xì)胞內(nèi)一種重要細(xì)胞器,是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場所。細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)所需要的能量,主要是通過線粒體呼吸作用來提供的;铙w染色是應(yīng)用無毒或毒性較小的染色劑真實(shí)地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動(dòng)的一種染色方法。詹納斯綠 B是線垃體的專一性活體染色劑。線粒體中細(xì)胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色,而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原,成為無色狀態(tài)。
(二)方法
用空氣栓塞處死兔子,置于解剖盤內(nèi),迅速打開腹腔,取兔肝邊緣較薄的肝組織一小塊(2~3mm3),放入盛有Ringer氏液的平皿內(nèi)洗去血液(用鑷子輕壓),用吸管吸去Ringer氏液,在平皿內(nèi)加1/300詹納斯綠B染液,讓組織塊上表面露在染液外面,使細(xì)胞內(nèi)線粒體的酶系可進(jìn)行充分的氧化,這樣才有利于保持染料的氧化狀態(tài),使線粒體著色。當(dāng)組織塊邊緣染成籃色時(shí)即可,一般需要染30分鐘。
染色后,將組織塊移到載片上,用鑷子將組織塊拉碎,就會(huì)有一些細(xì)胞或細(xì)胞群從組織塊脫離。
將稍大的組織塊去掉,使游離的細(xì)胞或細(xì)胞群留在載片上,加一滴Ringer氏液,蓋上蓋片,吸去多余水分。
(三)結(jié)果
顯微鏡觀察,肝細(xì)胞質(zhì)中許多線粒體被染成藍(lán)綠色,呈顆粒狀。
二、線粒體的光鏡切片觀察
用詹納斯綠B染色的兔肝細(xì)胞光鏡切片,肝細(xì)胞中的線粒體呈藍(lán)綠色的顆粒。
三.線粒體的電鏡照片觀察
不同細(xì)胞中線粒體的形態(tài)和數(shù)目不同。線粒體的外形多樣,如圓形、橢圓形、啞鈴形和桿狀。線粒體的數(shù)目與細(xì)胞類型和細(xì)胞的生理狀態(tài)有關(guān),線粒體多聚集在細(xì)胞生理功能旺盛的區(qū)域。
線粒體脊的數(shù)目與分布方式是多種多樣的。一般與線粒體長軸垂直排列,但也可見到與線粒體長軸平行排列的脊。脊的橫切面呈囊狀或管狀。脊的數(shù)量與細(xì)胞呼吸機(jī)能的強(qiáng)度有很大關(guān)系。
這有三張線粒體超薄切片的電鏡照片:第一張是小鼠腎小管上皮細(xì)胞中線粒體的電鏡照片,可見線粒體呈橢圓形和桿狀,由雙層膜包圍,內(nèi)膜向內(nèi)突起成平板狀脊,脊與線粒體長軸垂直排列,腎小管上皮細(xì)胞重吸收作用需要能量,線粒體數(shù)目多。第二張是恒河猴脊髓突觸內(nèi)線粒體?梢娋粒體體積小、數(shù)目多,脊與線粒體呈同心圓排列。第三張是小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞線粒體,線粒體的脊為分支的管,在照片上呈單層膜泡狀。