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細胞培養(yǎng)-冷凍細胞活化

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
1. 冷凍細胞之活化原則為快速解凍,以避免冰晶重新結(jié)晶而對細胞造成傷害,導致細胞之死亡。
2. 細胞活化后,約需數(shù)日,或繼代一至二代,其細胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。
3. 材料
3.1 37 oC 恒溫水槽
3.2 新鮮培養(yǎng)基
3.3 無菌吸管/ 離心管/ 培養(yǎng)瓶
3.4 液氮或干冰容器
4. 步驟:
4.1 操作人員應(yīng)戴防護面罩及手套,防止冷凍管可能爆裂之傷害。
4.2 自液氮或干冰容器中取出冷凍管,檢查蓋子是否旋緊,由于熱脹冷縮過程,此時蓋子易松掉。
4.3 將新鮮培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫,回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。
4.4 取出冷凍管,立即放入37 °C 水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化,以70 % ethanol 擦拭保存管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。
4.5 取出0.9 ml 解凍之細胞懸浮液,緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi)(稀釋比例為1:10~1:15),混合均勻,放入CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。另取0.1 ml 解凍細胞懸浮液作存活測試。
4.6 解凍后是否立即去除冷凍保護劑(例如DMSO 或glycerol),依細胞種類而異,一般而言,大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除,則將解凍之細胞懸浮液加入含有5-10 ml 培養(yǎng)基之離心管內(nèi),離心1,000 rpm, 5 分鐘,移去上清液,加入新鮮培養(yǎng)基,混合均勻,放入CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
4.7 若不需立即去除冷凍保存劑,則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。
 

 

 
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