(1)取新鮮雞血以0.85%生理鹽水制成10%的懸液。
(2)稱(chēng)取0.5克PEG(MW=4,000)放入試管內(nèi),在酒精燈上融化之,迅速加入0.5ml預(yù)熱的Hanks液混勻制成50%的PEG溶液。放入37℃水浴中待用。
(3)取上述10%的雞紅細(xì)胞懸液1ml放入離心管中,再加入5ml Hanks液混勻,然后以1,000rpm離心5分鐘,小心棄去上清,用指彈法將細(xì)胞團(tuán)塊彈散。
(4)取上述50%PEG溶液0.5ml,在1分鐘內(nèi)滴加到雞紅細(xì)胞懸液,邊加邊輕輕搖動(dòng)混勻。待PEG全部加入后靜置1分鐘左右。此全部過(guò)程都要求在37℃水浴內(nèi)進(jìn)行。
(5)緩慢滴加9ml Hanks液以終止PEG的作用,在37℃水浴內(nèi)靜置5分鐘。
(6)離心棄上清后,取一滴融合后的細(xì)胞懸液滴片,加蓋片鏡檢。