各種已被命名和經(jīng)過細胞生物學鑒定的細胞系或細胞株，都是一些形態(tài)比較均一、生長增殖比較穩(wěn)定的和生物性狀清楚的細胞群。因此凡符合上述情況的細胞群也可給以相應(yīng)的名稱，即文獻中常稱之為已鑒定的細胞（Certified Cells）。已鑒定的細胞可用于各種實驗研究和生產(chǎn)生物制品。當前世界上已建的各種細胞系（株）已難勝數(shù)，我國也建有百種以上，并在不斷增長中。
一、體外培養(yǎng)細胞的種類和命名
體外培養(yǎng)細胞的名稱，隨培養(yǎng)細胞技術(shù)的發(fā)展和細胞種類的增多而演變。最早采用的名稱為細胞株（Cell strain），以后又出現(xiàn)細胞系（Cell Line）一詞，兩者曾一度混用致概念不明確，導致文獻中也很混亂。我國也曾有類似情況，在我國尚未制定出統(tǒng)一名詞前，本書用的名詞基本參考Schaeffer，W.I.（1979）和國內(nèi)有關(guān)會議、以及國內(nèi)外雜志常用名詞為準。
（一）初代培養(yǎng)
初代培養(yǎng)又稱原代培養(yǎng)，即直接從體內(nèi)取出的細胞、組織和器官進行的第一次的培養(yǎng)物。一旦已進行傳代培養(yǎng)（Subculture）的細胞，便不再稱為初代培養(yǎng)，而改稱為細胞系。
（二）細胞系
初代培養(yǎng)物開始第一次傳代培養(yǎng)后的細胞，即稱之為細胞系。如細胞系的生存期有限，則稱之為有限細胞系（Finite Cell Line）；已獲無限繁殖能力能持續(xù)生存的細胞系，稱連續(xù)細胞系或無限細胞系（Infinite Cell Line）。無限細胞系大多已發(fā)生異倍化，具異倍體核型，有的可能已成為惡性細胞，因此本質(zhì)上已是發(fā)生轉(zhuǎn)化的細胞系。無限細胞系有的只有永生性（或不死性），但仍保留接觸抑制和無異體接種致癌性；有的不僅有永生性，異體接種也有致瘤性，說明已惡性化。這兩種不同性質(zhì)的無限細胞系，在國內(nèi)外文獻中對這些名詞的應(yīng)用上也常不十分嚴格。為概念上的明確，對有惡性的無限細胞系采用“惡性轉(zhuǎn)化細胞系”一詞表示可能更妥。而對那些只具永生性而無惡性的細胞系，則用無限細胞系或轉(zhuǎn)化細胞系即可。當前流傳的NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均屬這類細胞系。
由某一細胞系分離出來的、在性狀上與原細胞系不同的細胞系，稱該細胞系的亞系（Subline）。
（三）克隆細胞株
從一個經(jīng)過生物學鑒定的細胞系用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群，稱細胞株。再由原細胞株進一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細胞群，亦可稱之為亞株（Substrain）
（四）二倍體細胞
細胞群染色體數(shù)目具有與原供體二倍細胞染色體數(shù)相同或基本相同（2n細胞占75％或80％以上）的細胞群，稱二倍體細胞培養(yǎng)。如僅數(shù)目相同，而核型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體。二倍體細胞在正常情況下具有限生命期，故屬有限細胞系。但隨供體年齡和組織細胞的不同，二倍體細胞的壽命長短各異。人胚肺成纖維細胞可傳50代土10代，人胚腎只有8～10代，人胚神經(jīng)膠質(zhì)細胞15～30代；如從老齡個體取可傳50則細胞生存期更短。由不同年齡供體取材建立的二倍體細胞系可供研究衰老之用。為保持二倍體細胞能長期被利用，一般在初代或2～5代即大量凍存作為原種（Stook Cells），用時再進行繁殖，用后再繼續(xù)凍存，可供長期使用或延緩細胞的衰老。
（五）遺傳缺陷細胞
從有先天遺傳缺陷者取材（主要為成纖維細胞）培養(yǎng)的細胞，或用人工方法誘發(fā)突變的細胞，都屬遺傳缺欠細胞。這類細胞可能具有二倍體核型，也可呈異倍體。
（六）腫瘤細胞系或株
這是現(xiàn)有細胞系中最多的一類，我國已建細胞系主要為這類細胞。腫瘤細胞系多由癌瘤建成，多呈類上皮型細胞，常已傳幾十代或百代以上，并具有不死性和異體接種致瘤性。
對已建成的各種細胞系或細胞株習慣上都給以名稱；細胞的命名無嚴格統(tǒng)一規(guī)定，大多采用有一定意義縮寫字或代號表示。但不論什么形式，均不宜太長，以便記憶和了解，今別舉以下幾種代表性的細胞名稱供參考：
HeLa：為供體患者的姓名（來源于宮頸癌）
CHO：中國地鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovary）
宮-743：宮頸癌上皮細胞，1974年3月建立
NIH3T3：美國國立衛(wèi)生研究所（National Institute of Health）建立；每3天傳代，每次接種3×105細胞／毫升。
二、建立細胞系（或株）的要求
關(guān)于什么樣的體外培養(yǎng)細胞群，可被確認為是已被鑒定的細胞（Certified Cells），國際上也尚無統(tǒng)一的規(guī)定，一般依具體情況而定。在只用作初代培養(yǎng)細胞，只要供體性別、年齡等均一，取材部位及組織種類等條件穩(wěn)定，做鑒定的項目無需很多，有幾項能說明細胞的相關(guān)性狀的即可。如能長期保存并可供其它研究室使用，特別是做反復(fù)傳代的細胞，習慣上有以下一些要求，并在刊物上報道時應(yīng)加以說明。
（－）組織來源
應(yīng)說明細胞供體所屬物種，來自人體，動物或其它；供體的年齡、性別、取材的器官或組織；如系腫瘤組織，應(yīng)說明臨床病理診斷，組織來源，以及病例號等。
（二）細胞生物學檢測
應(yīng)了解細胞一般和特殊的生物學性狀，如細胞的一般形態(tài)、特異結(jié)構(gòu)、細胞生長曲線和分裂指數(shù)、倍增時間、接種率；特異性，如為腺細胞有否特殊產(chǎn)物包括分泌蛋白或激素等；如為腫瘤細胞，應(yīng)力求證明細胞確系來源于原腫瘤組織而非其它，并仍保持性性，為此需做軟瓊脂培養(yǎng)、異體動物接種致瘤性和對正常組織浸潤力等實驗。
（三）培養(yǎng)條件和方法
各種細胞都有自己比較適應(yīng)的生存環(huán)境，因此應(yīng)指明使用的培養(yǎng)基、血清種類、用量以及細胞生存的適宜pH等。

三、若干細胞建株的要點及基本過程
（一）腫瘤細胞培養(yǎng)技術(shù)要點
1、取材：材料主要來源于外科手術(shù)或活檢瘤組織，取材時避免用壞死組織，要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位，瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng)，因故不能立即培養(yǎng)者，可凍存。其培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。
2、成纖維細胞排除：在腫瘤組織中�；祀s有一些成纖維細胞，培養(yǎng)時能與瘤細胞同時生長，并常壓過癌細胞，導致癌細胞生長受阻以至消失，應(yīng)仔細排除。
排除方法常有：機械刮除法、反復(fù)貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。
3、提高腫瘤細胞培養(yǎng)存活率和生長率
根據(jù)實驗經(jīng)驗，腫瘤細胞在體外不易培養(yǎng)，建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。一般當腫瘤組成或細胞被原代培養(yǎng)后，要經(jīng)過對新環(huán)境的適應(yīng)才能生長，因此不能局限于一般培養(yǎng)法，須采用一些特殊措施。如：用適宜底物，鼠尾膠原底層及飼細胞底層等。用細胞生長因子，根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子，如胰島素、氫化可的松，雌激素等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。
（二）人類淋巴母細胞建株方法
l、4ml肝素抗凝血于離心管中，加入2ml RPMI 1640。
2、混勻后沿管壁緩慢加到預(yù)置有4ml淋巴細胞分離液的液面上靜置30min。
3、1500rpm，15min，吸取白細胞層（第二層）于另一離心管中。
4、加RPMI 1640 5ml洗滌白細胞兩次。
5、將白細胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中，加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EBV（EB病毒）液，混勻。
6、水浴搖床，40次/分，37℃，3hr。
7、1500rpm，15min。將細胞接種至1ml培養(yǎng)基中（內(nèi)含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl環(huán)胞霉素，輕輕混勻，37℃培養(yǎng)。
8、5天后觀察細胞轉(zhuǎn)化和生長情況，決定是否半量換液。一般半量換液l—2次，并維持環(huán)胞霉素的濃度。
9、待轉(zhuǎn)化細胞數(shù)量明顯上升，并出現(xiàn)細胞團塊后，可轉(zhuǎn)入25ml細胞培養(yǎng)瓶中，加1—2ml培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)10—15天，一般每隔3—4天觀察一次，決定是否換液，傳代。
10、細胞生長達一定數(shù)量后凍存，凍存前應(yīng)進行核型分析和存檔。

四、已建立細胞系或株的鑒定、管理和使用
近些年，當一個細胞系或細胞林建成后，我國常通過組織專家開鑒定會的形式予以鑒定，從學術(shù)角度考慮，此舉實非必要。按國際慣例，只要研究認真負責地把有關(guān)資料在雜志或刊物上報道，詳細介紹上述各項目即可。
以前因未建立統(tǒng)一的細胞庫時，對已建立的細胞系（株）多由作者單位自行保管，有浪費人力、交流使用不便、細胞易污染和丟失等弊病。我國已初建成小規(guī)模貯存細胞機構(gòu)，待獲進一步發(fā)展，這對我國細胞培養(yǎng)必將有更大促進作用。
國際上美、英和日本等國已建有細胞庫；美國已有美國標準細胞庫或細胞銀行（ATCC）和人遺傳突變細胞庫（HGMR）、細胞衰老細胞庫（CAR）等，其中ATCC不僅是美國也世界最大的細胞庫。ATCC下屬有一組協(xié)作實驗室和一個由眾多專家組成的咨詢委員會。ATCC也是美國國立癌癥研究所（NCI）和美國衛(wèi)生研究所中（NIH）的資源庫，尤與NCI有密切的關(guān)系。ATCC也是世界衛(wèi)生組織WHO的國際培養(yǎng)細胞文獻中心。ATCC現(xiàn)液氮凍存有3200個已經(jīng)過鑒定的細胞系（1992），其中包括來自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細胞系；和來自不同物種的近75個雜交瘤細胞株。ATCC接納來自世界各國已經(jīng)鑒定的細胞予以貯存，同時也向世界各國的研究者或?qū)嶒炇颐赓M提供研究用細胞（做盈利性研究時收費。） ATCC接納入庫細胞時，必須符合其入庫標準， ATCC入庫細胞要求檢測項目如下：
培養(yǎng)簡歷：組織來源日期、物種、組織起源、性別、年齡、供體正�；虍惓＝】禒顟B(tài)、細胞已傳代數(shù)等
凍 存 液：培養(yǎng)基和防凍液名稱
細胞活力：融解前后細胞接種存活率和生長特性
培 養(yǎng) 液：培養(yǎng)基種類和名稱（一般要求不含抗生素）、血清來源和含量
細胞形態(tài)：類型，如為上皮或成纖維細胞等，融解后細胞生長特性
核 型：二倍體或多倍體，標記染色體的有無
無污染檢測：包括細菌、真菌、支原體、原蟲和病毒等
物種檢測：檢測同工酶，主要為G6PD和LDH，以證明細胞有否交叉污染以及反轉(zhuǎn)錄酶檢測
免疫檢測：一兩種血清學檢測
細胞建立者：建立者姓名；檢測者姓名
以上為ATCC入庫基本要求，雜交瘤入庫標準尚有所不同，詳細情況請參閱ATCC的“Catalogue of Cell Lines and Hybridomas”。