硫磺霜由間苯二酚、升華硫、甘油等成分組成。主要用于治療體癬、脂溢性皮炎等。原標(biāo)準(zhǔn)中無間苯二酚的含量測定方法，為了更好地控制藥品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法測定硫磺霜中間苯二酚含量的新方法。

 

1、儀器與試劑

 

SSISPC3000高效液相色譜儀；梅特勒百萬分之一天平(AG135)。硫磺霜本院自制制劑批號(hào)：080201，080202，080202；間苯二酚對(duì)照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：100389-200301；甲醇為色譜純，乙酸為分析純。

 

2、方法與結(jié)果

 

2.1色譜條件色譜柱為KromasilC18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動(dòng)相為甲醇-2%乙酸溶液(40:60)［1］；檢測波長254nm［2］；流速1.0ml/min;柱溫為室溫；進(jìn)樣量為10μl,理論板數(shù)按間苯二酚峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

 

2.2溶液的制備

 

2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取在硫酸干燥器中干燥至恒重的間苯二酚對(duì)照品［3］約30mg,置50ml量瓶中，加乙醇30ml振搖溶解，加乙醇至刻度，搖勻。精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

 

2.2.2供試品溶液的制備取本品約1g，精密稱定，置50ml量瓶中，加乙醇30ml，水浴加熱使基質(zhì)溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，置冰浴中冷凍2h，取出，迅速過濾，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

 

2.2.3陰性樣品溶液的制備取不含間苯二酚的陰性樣品，同供試品溶液的制備方法制備。

 

2.3線性范圍的考察精密稱取間苯二酚約60mg，加水溶解后定容至50ml，搖勻，分別取10，5，3，2，1ml加水稀釋至50ml，搖勻，制成系列對(duì)照品溶液。分別進(jìn)樣10μl，測定峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，線性方程：A=1687C 2078.1(r=0.9993，n=5)。

 

2.4精密度實(shí)驗(yàn)吸取間苯二酚對(duì)照品溶液10μl(60μg/ml)，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得間苯二酚峰面積值的RSD=0.92%,精密度良好。

 

2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液分別于0，1，2，4，8h分別測定其峰面積，結(jié)果間苯二酚RSD為0.86%。試驗(yàn)結(jié)果表明待測溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

 

2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)樣品5份，按供實(shí)品溶液的制備方法制備成供試品溶液，按上述條件進(jìn)行測定，結(jié)果間苯二酚含量平均值為99.6%，RSD為0.95%。表明實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

 

2.7回收率實(shí)驗(yàn)取空白樣品9份，分別精密加入間苯二酚適量(約相當(dāng)于制劑中間苯二酚含量的80%，100%，120%)，照含量測定項(xiàng)下方法依法測定間苯二酚含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。表1間苯二酚回收率試驗(yàn)結(jié)果(略)

 

2.8樣品測定

 

取本品1g，精密稱定，置50ml量瓶中加乙醇30ml，水浴加熱使基質(zhì)溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，置冰浴中冷凍2h，取出，迅速過濾，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取間苯二酚對(duì)照品溶液10μl(60μg/ml)，同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

 

2.9樣品含量測定結(jié)果供試品3批含量測定結(jié)果見表2。表2間苯二酚含量測定結(jié)果(略)

 

3、討論

 

取供試品溶液與對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液，分別進(jìn)樣，結(jié)果供試品呈現(xiàn)與間苯二酚保留時(shí)間相同的色譜峰，而陰性樣品溶液在該保留時(shí)間處未見色譜峰，說明陰性樣品溶液不干擾供試品的測定。