国产黄片无马赛克在线观看_国产成人在线播放_国产综合A级片视频_亚洲va无码va亚洲

食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號(hào)

在小規(guī)模的SFC純化中使用ELSD觸發(fā)餾份收集的可行性

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2011-12-15  來(lái)源:www.waters.com
核心提示: 在小規(guī)模的SFC純化中使用ELSD觸發(fā)餾份收集的可行性

引言
當(dāng)比較HPLC和SFC的多項(xiàng)應(yīng)用時(shí),有人發(fā)現(xiàn)SFC因超臨界液體的低粘滯度和高擴(kuò)散率而能提供更好的選擇性和更短的分析時(shí)間。
SFC用于制備模式時(shí)可顯著降低成本,這是因?yàn)轲s份通常收集在較小體積的揮發(fā)性醇中而由此減少了相當(dāng)多的純化后續(xù)工作。乙腈(ACN)的持續(xù)短缺也促使多個(gè)行業(yè)對(duì)SFC在分析和純化方面能否替代乙腈依賴性反相液相色譜(RPLC)進(jìn)行評(píng)價(jià)。現(xiàn)在,科學(xué)家在探尋、企業(yè)也在開發(fā)更多適用于SFC的包括UV、FID、MS和ELSD在內(nèi)的檢測(cè)器。
蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)最初為高效液相色譜(HPLC)進(jìn)行基于質(zhì)量的非揮發(fā)性化合物檢測(cè)而設(shè)計(jì)1。因?yàn)檫@種檢測(cè)機(jī)制不依賴于化合物的光學(xué)屬性,所以ELSD被認(rèn)為是一種通用檢測(cè)器,特別適用于檢測(cè)不存在紫外光發(fā)色團(tuán)的分析物。很多制藥實(shí)驗(yàn)室和化學(xué)實(shí)驗(yàn)室將ELSD與紫外檢測(cè)和質(zhì)譜(MS)同時(shí)使用,以確保用于對(duì)組成各異或比較復(fù)雜的混合化合物進(jìn)行色譜分析的通用檢測(cè)的“真實(shí)性”。ELSD也被發(fā)現(xiàn)可廣泛用于包括膳食補(bǔ)充劑、運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)品、維生素、有機(jī)食品、飲料、化妝品和美容產(chǎn)品在內(nèi)的天然產(chǎn)品的分析和純化。
我們?cè)鴪?bào)告過(guò)使用SFC ELSD分析運(yùn)動(dòng)飲料中甜味劑的個(gè)案研究2以及對(duì)SFC ELSD試驗(yàn)參數(shù)所進(jìn)行的詳細(xì)評(píng)價(jià)3,這兩項(xiàng)研究均采用分析規(guī)模。我們?cè)诖顺尸F(xiàn)關(guān)于ELSD用于小規(guī)模制備型SFC的可行性研究。我們希望此處所述的結(jié)果能促進(jìn)專業(yè)人員將ELSD并入涉及分析和制備規(guī)模SFC的日常工作流程中。
試驗(yàn)
材料
酮洛芬和對(duì)乙酰氨基酚購(gòu)自西格瑪奧德里奇公司(美國(guó)密蘇里州圣路易斯市)。將酮洛芬和對(duì)乙酰氨基酚溶解于HPLC級(jí)甲醇中,制得用于分析試驗(yàn)的0.5 mg/mL儲(chǔ)備液和用于純化的5 mg/mL儲(chǔ)備液。硅膠柱(分析型:4.6 x 250 mm,填充5 μm顆粒;制備型:10 x 250 mm,填充6 μm顆粒)購(gòu)自普林斯頓色譜儀器公司(美國(guó)新澤西州普林斯頓)。
色譜分析
各項(xiàng)試驗(yàn)均使用配備沃特世2998型光電二極管陣列(PDA)檢測(cè)器和沃特世ELSD(美國(guó)馬薩諸塞州米爾福德)的一臺(tái)SFC Investigator II儀器(沃特世子公司T harSFC,美國(guó)賓夕法尼亞州匹茲堡)進(jìn)行。
ELSD信號(hào)(模擬信號(hào)輸出)通過(guò)模數(shù)轉(zhuǎn)換器傳輸?shù)絊uperChrom軟件。一個(gè)10 μL的定量環(huán)用于各次分析型進(jìn)樣,而一個(gè)200 μL的定量環(huán)則用于各次制備型進(jìn)樣。ELSD使用一根內(nèi)徑0.010英寸的不銹鋼三通和25 μ x50 cm的PeekSil管在PDA和反壓調(diào)節(jié)器之間分流出來(lái)。分析型方法在流速為4 mL/分鐘(85:15 CO2/甲醇)、反壓為150巴和溫度為40?C的條件下運(yùn)行。分析型方法的ELSD條件設(shè)置如下:增益=1000、噴霧器溫度= 45?C、管道溫度= 45?C、壓力= 30 psi。制備型方法在流速為10 mL/分鐘(80:20 CO2/甲醇)、反壓為150巴和溫度為40?C的條件下運(yùn)行。ELSD條件設(shè)置如下:增益=1000、噴霧器溫度= 28 ?C、管道溫度= 50 ?C、壓力= 60 psi。收集裝置上的補(bǔ)償泵被設(shè)置為每分鐘用泵抽吸2 mL甲醇。對(duì)于純化應(yīng)用,以200μL的進(jìn)樣量連續(xù)進(jìn)樣五次,或者說(shuō)每種化合物進(jìn)樣1 mg(兩種化合物共2 mg),那么每種化合物的進(jìn)樣總量為5mg(兩種化合物共10 mg)。
結(jié)果和討論
圖1顯示了使用ELSD和UV得出的酮洛芬/對(duì)乙酰氨基酚混合物的分析型SFC色譜圖。ELSD和UV信號(hào)之間略微存
在時(shí)間滯后(約2秒)。由于ELSD信號(hào)用于餾份觸發(fā),因此滯后時(shí)間對(duì)制備型色譜特別重要。應(yīng)充分注意確保信
號(hào)處理時(shí)間與流出液達(dá)到收集閥的時(shí)間保持一致,或者需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)挠?jì)時(shí)補(bǔ)償,以盡可能減少收集過(guò)程中的
損失。例如,在我們的試驗(yàn)中使用了一根25 μ × 50 cm的PeekSil管,以將主流量分流到ELSD中。首選小內(nèi)徑管,
以盡可能減少進(jìn)入ELSD的流量,實(shí)現(xiàn)樣本損失量的最小化。然而,管長(zhǎng)由UV和ELSD信號(hào)之間的時(shí)間滯后而決
定。較長(zhǎng)的管子將因抗性增強(qiáng)而進(jìn)一步減少流入ELSD的樣本量;然而,這也將增加兩種信號(hào)之間的時(shí)間滯后。
在本例中,2秒的時(shí)間滯后小于總峰寬的3%。
其次,我們優(yōu)化了制備型進(jìn)樣的ELSD設(shè)置,結(jié)果如圖2所示。從分析型到制備型設(shè)置出現(xiàn)了兩個(gè)改變:流速?gòu)? mL/分鐘提高到10 mL/分鐘,改性劑百分比從15%增加20%;這兩種改變將導(dǎo)致流入ELSD的液體增多。在我們的前一項(xiàng)研究3中,對(duì)氣體流速和蒸發(fā)溫度的作用進(jìn)行了描述。簡(jiǎn)言之,氣體流速越高,停留時(shí)間就越短,出現(xiàn)散射的次數(shù)也越少,進(jìn)而信號(hào)越差。氣體流速越高,噴霧過(guò)程中所形成的小顆粒就越多。粒徑的減小也導(dǎo)致散射光的強(qiáng)度降低。此外,也建議將蒸發(fā)溫度維持在盡可能低的水平下,以保持粒徑的一致性,并通過(guò)增強(qiáng)溶解結(jié)晶作用而獲得更好的信號(hào)。這一點(diǎn)與圖2所示的結(jié)果吻合:增加氣體流速和降低蒸發(fā)溫度似乎可產(chǎn)生帶有更少“尖峰”的更窄色譜峰。注意制備型進(jìn)樣的樣本濃度要高得多;靈敏度不再是主要關(guān)注點(diǎn)。恰恰相反,優(yōu)化目標(biāo)在于產(chǎn)生可靠且重現(xiàn)性好的信號(hào)。有代表性的制備型SFC色譜圖見圖3。圖3(b)顯示了疊加進(jìn)樣的SFC色譜圖。循環(huán)時(shí)間通過(guò)進(jìn)行疊加進(jìn)樣而更為縮短,進(jìn)一步提高了產(chǎn)能;厥章屎图兌韧ㄟ^(guò)再次進(jìn)樣所收集的餾份并將由此得到的峰面積與預(yù)先繪制的校準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較而確定。在本研究中,酮洛芬和對(duì)乙酰氨基酚的回收率分別為88%和84%,純度分別為98%和100%。





 
結(jié)論
 
在本研究中,我們證實(shí)了使用ELSD可觸發(fā)小規(guī)模制備型SFC的餾份收集。本研究所用標(biāo)準(zhǔn)品的回收率大于84%,純度大于98%。儀器配置和ELSD優(yōu)化方面的根本原則應(yīng)該同樣適用于大規(guī)模制備型SFC。
 
編輯:songjiajie2010

 
分享:
關(guān)鍵詞: SFC ELSD
 

 
 
推薦圖文
推薦檢驗(yàn)技術(shù)
點(diǎn)擊排行
檢驗(yàn)技術(shù)
 
 
Processed in 0.057 second(s), 12 queries, Memory 0.9 M