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內(nèi)毒素即革蘭陰性菌細胞壁中的脂多糖(LPS),存在于細菌的細胞外膜,當細菌死亡后,細胞膜破裂就釋放出來,由核心多糖、側(cè)翼多糖及脂A組成,體積微小,其粒徑約在1~ 5毫微米(Nanotex nm,為千分之一微米1×10－3m m),一般認為其分子量在1000以上.具有水溶性、不揮發(fā)性、不帶有正電性和負電性等特征.其耐熱性,一般在60℃加熱1小時無影響,100℃不裂解,120℃加熱四小時能破壞98％,180－200℃干熱2小時或250℃加熱半小時才能完全破壞.
內(nèi)毒素生物學活性多種多樣,在體內(nèi)作用錯綜復雜,參與了機體許多病理生理反應過程.內(nèi)毒素可以誘發(fā)機體炎癥因子的過度釋放,導致系統(tǒng)性炎癥反應綜合癥、多器官衰竭,死亡率很高,占死因的50－70%.
推薦1曾經(jīng)試過從大腸桿菌中提取粗制內(nèi)毒素,用的方法是反復加熱、凍存法,但是效果不是理想.具體方法是將大腸桿菌在2個大氣壓下(因具體條件限制,我只是在1.2個氣壓左右),蒸汽滅菌30min,后－20度凍存24小時,反復3次,即可.
推薦2,目前,市面上有賣從轉(zhuǎn)染后的質(zhì)粒DNA溶液中提取內(nèi)毒素的試劑盒(因為,轉(zhuǎn)染后質(zhì)粒DNA溶液若含有內(nèi)毒素,可能導致轉(zhuǎn)染的失敗),其也可以從細菌死亡裂解后的溶液中提取內(nèi)毒素.
推薦3,傳統(tǒng)的內(nèi)毒素提取方法就是加熱菌液或用其它方法使細菌裂解,然后用特殊石棉濾板過濾即可.
推薦,純化重組蛋白的時候經(jīng)常需要去除內(nèi)毒素,當然同樣的操作也可以提取內(nèi)毒素.
推薦4,如果做正規(guī)的內(nèi)毒素實驗可以購買LPS O111:4或O55:5.
