厭氧菌在有氧的情況下不能生長.要培養(yǎng)厭氧菌,必須創(chuàng)造一個無氧的環(huán)境.通常用培養(yǎng)基中加入還原劑,或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧,以降低氧化還原電勢.如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基,牛心腦浸液培養(yǎng)基等.常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多,可根據(jù)實際情況選用.
厭氧缸法
接種好標(biāo)本的平板或液體培養(yǎng)基試管,可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng),厭氧缸是普通的干燥缸,用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境,從而將厭氧菌培養(yǎng)出來.
厭氧袋法(bio-bag)
即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌.塑料袋透明而不透氣,內(nèi)裝氣體發(fā)生管(有硼氫化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑.放入已接種好的平板后,盡量擠出袋內(nèi)空氣,然后密封袋口.先折斷氣體發(fā)生管,后折斷美蘭指示劑管,命名袋內(nèi)在半小時內(nèi)造成無氣環(huán)境.如不突變表示袋內(nèi)已達(dá)厭氧狀態(tài),可以孵育.
厭氧手套箱法(anaerobie glove box)
一個密閉的大型金屬箱,箱的前面有一個有機(jī)玻璃做的透明面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內(nèi)進(jìn)行操作,故名.箱側(cè)有一交換室,具有內(nèi)外二門,內(nèi)門通箱內(nèi)先關(guān)著.欲放物入箱,先打開外門,放入交換室,關(guān)上外門進(jìn)行抽氣和換氣(h2,co2,n2)達(dá)到厭氧狀態(tài),然后手伸入手套把交換室內(nèi)門打開,將物品移入箱內(nèi),關(guān)上內(nèi)門.箱內(nèi)保持厭氧狀態(tài),也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理.該箱可調(diào)節(jié)溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內(nèi),還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落,這種厭氧箱適于作厭氧細(xì)菌的大量培養(yǎng)研究,大量培養(yǎng)基可放入作預(yù)還原和厭氧性無菌試驗.金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環(huán)境和溫度等均系自動調(diào)節(jié).