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致病性弧菌及檢測

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-09-01
核心提示:  一、致病性弧菌的流行病學(xué)1、致病性  在眾多的弧菌之中,致病性差距很大。O1型霍亂弧菌被WHO定為國際

一、致病性弧菌的流行病學(xué)

1、致病性

  在眾多的弧菌之中,致病性差距很大。O1型霍亂弧菌被WHO定為國際檢疫菌,而同時有許多種和生物型根本不具致病性。

生物分類學(xué)上的霍亂弧菌有許多血清型致病性很弱、甚至不具致病性。

  1995年《美國臨床微生物手冊》第六版明確了弧菌屬的致病菌為12種,它們的名稱及致病情況如下表所示:

表1. 致病性弧菌及所致疾病

弧菌種類

臨床表現(xiàn)

胃腸炎

創(chuàng)傷感染

耳感染

敗血癥

O1型霍亂弧菌

O139型霍亂弧菌

擬態(tài)弧菌

河弧菌

副溶血性菌

霍利斯性菌

溶藻弧菌

弗尼斯菌

創(chuàng)傷弧菌

麥契尼可夫弧菌

海魚弧菌

辛辛那提菌

鯊魚弧菌

+++

+++     ++       +       +

++             +

++

+++                   +

++                    +

(+)    ++       ++      +

(+)    ++              ++

(+)    ++              ++

(+)

      ++              +

                     +

      +

注:+++:常見;++:不常見;+:罕見;帶括號者為腸道感染的病因作用尚未確定。

  12種致病性弧菌的致病性差別較大,所致疾病的種類和毒性差別較大。在這12種致病菌中,最重要的,也是出問題最多的
是O1型霍亂弧菌、非O1型霍亂弧菌、副溶血弧菌和創(chuàng)傷弧菌。國內(nèi)外均是如此。美國FDA在“食品微生物控制”中特別強調(diào)了這
四種菌,歐洲的NMKL也對這四種菌提出了特別要求,并有專門方法NMKL No.156頒布。

2、美國FDA對霍亂、副弧、創(chuàng)傷弧菌的認識(見表2)

3、致病性弧菌的控制

  弧菌和其它G-菌一樣,是嗜溫型菌,生長需較高的溫度,高水活度,中性pH。與其它不一樣的是,生長需要鹽,故而十分耐鹽,
但輕微熱處理很易將其殺滅。

  蒸煮控制,防止二次污染,防止時間/溫度控制不當(注意冷藏),控制產(chǎn)品來源。

二、致病性弧菌的分類學(xué)位置和生物學(xué)性狀

1、致病性弧菌的分類

  根據(jù)伯杰氏細菌手冊第九版的描述,12種致病性弧菌的分類學(xué)位置如下表所示:

第5部分 革蘭氏陰性兼性厭氧桿菌

弧菌科

弧菌屬

致病性弧菌

  伯杰氏細菌手冊將細菌分為35部分(Group),第5部分為革蘭氏陰性兼性厭氧桿菌,包括弧菌科、腸桿菌科、巴斯德氏菌科、
其他屬,弧菌科包括弧菌屬、發(fā)光桿菌屬、氣單胞菌屬、鄰單胞菌屬和Enhydrobacter屬。

  弧菌屬共有37個種(變種),其中已明確有12個種對人類有致病作用;【鷮俚姆N除了霍亂弧菌和擬態(tài)弧菌之外均為海洋性細菌,
即有嗜鹽性;即使是這兩種菌, Nacl的存在也能促進生長。

2、致病性弧菌的生物學(xué)性狀

(1)致病性弧菌的基本特征

  根據(jù)分類學(xué)位置,致病性弧菌首先屬于弧菌科,所以具備弧菌科的所有特性:革蘭氏陰性、兼性厭氧,(。U狀。

  作為弧菌屬,可從下列特性與弧菌科的其他四個屬區(qū)別開來:DNA、G+C、 MOL%:38-51、O/129敏感:+、脂酶:+、 D-甘露醇
發(fā)酵:+、端生存鞘鞭毛+(其它沒有)

(2)致病性弧菌生理生化特性比較

  除此之外,12種致病性弧菌各有其不同的生理生化特征(見表3),這些特征是檢測和鑒定的依據(jù)和基礎(chǔ)。

2.FDA/CFSAN對弧菌的描述

菌名

病名

關(guān)食

發(fā)

宿主

染病

類型

創(chuàng)傷

弧菌

只感染人和靈長類動物,已從整個美國西海岸及內(nèi)陸鹽湖分出,包括水、沉積物、浮游生物、貝類

傷口感染、胃腸炎、原發(fā)性敗血病

16小時內(nèi)發(fā)病,健康人患胃腸炎,特殊生理狀況的人患原發(fā)性敗血病該病死亡率大于50%

健康人胃腸炎感染劑量不清,易感人群小于100

從傷口腹瀉物中培養(yǎng)出該菌

牡蠣、蛤蜊、蟹等

未有大爆發(fā),零散的多,特別是在溫暖月份

所有人易患胃腸炎,“特殊生理狀況”的人易患原發(fā)性敗血病

與糞便分離方法同,所有分離物均有致病性,

港灣水域

感染

副溶血性弧菌

可從海水和河口灣的水體、魚類、貝類中分出

副溶血性弧菌相關(guān)的胃腸炎

腹瀉、腹部痙攣、惡心、嘔吐、頭痛、發(fā)燒、畏寒,多為中等反應(yīng)

大于100萬,服解酸藥的更低

從腹瀉糞便中分離出該菌

魚類、貝類

溫暖月份發(fā)生過大爆發(fā),單個病例時有發(fā)生

所有食用了生的或加工不當?shù)聂~類和貝類的人

必須驗證分離物的致病性

港灣水域

感染

霍亂弧菌O1

亞洲多,沿海和河口灣可能有,個例報道時有發(fā)生

霍亂

脫水、伴有淘米水樣便、腹部痙攣、嘔吐、休克甚至死亡

100萬,有抗酸性結(jié)核病的更低

從腹瀉糞便中分離出該菌

貝類

飲料

各種食品

美國73年來僅有80

所有人都有可能,免疫系統(tǒng)發(fā)育不全,胃酸少,營養(yǎng)不良的更甚

由于致病性的和非致病性的都存在,故需做霍亂毒素實驗

污水、人

感染

霍亂弧菌非O1

只感染人和靈長類動物,存在于美國海與河口灣,稱非霍亂菌和非凝集霍亂菌

胃腸炎、非O1型霍亂

腹瀉、腹部痙攣、發(fā)燒、25%的嘔吐、大便帶血和粘稠物

猜想是大劑量(大于100萬)才能引起疫病

從腹瀉糞便中分離出該菌

貝類特別是牡蠣、各類食品

未有大爆發(fā),單個病例時有發(fā)生

所有食用的個體,但肝硬化和免疫抑制的個體可能引起嚴重并發(fā)癥如敗血癥

很多為非致病性的,需做致病性實驗,可用動物實驗做

港灣水域

感染

 

3 致病性弧菌的鑒別性狀

 

 

TCBS

 

m

C

P

C

 

A

G

S

Nacl生長

 

42℃生長

產(chǎn)

 

 

氧化酶

 

ONPG

 

VP試驗

精氨酸二氫酶

賴氨酸脫梭酶

鳥氨酸脫梭酶

 

O/

129

 

10

ug

 

O/

129

 

150

ug

 

 

明膠酶

 

 

脲酶

 

 

0%

 

 

3%

 

 

6%

 

 

8%

 

 

10%

蔗糖

D纖維二糖

乳糖

阿拉伯糖

D甘露糖

D甘露醇

溶藻弧菌

Y

NG

KA

-

+

+

+

+

+

+

-

-

-

+

+

+

-

+

-

+

+

R

S

+

-

霍亂弧菌

Y

P

Ka

+

+

-

-

-

+

+

-

-

-

+

+

+

+

V

-

+

+

S

S

+

-

辛辛那提弧菌

Y

nd

nd

-

+

+

-

-

-

+

+

-

+

+

-

+

+

+

-

+

-

R

S

-

-

海魚弧菌

G

NG

nd

-

+

V

-

-

-

-

+

-

-

+

-

+

-

+

+

V

-

S

S

-

+

河弧菌

Y

NG

KK

-

+

+

V

-

V

+

+

-

+

+

+

+

+

-

+

-

-

R

S

+

-

弗尼斯弧菌

Y

NG

KK

-

+

+

+

-

-

+

-

-

+

+

+

+

+

-

+

-

-

R

S

+

-

鯊魚弧菌

Y

nd

nd

-

+

+

+

-

nd

+

+

-

-

+

+

+

-

-

-

+

+

R

S

+

+

霍利斯弧菌

NG

NG

Ka

-

+

+

-

-

nd

-

-

-

+

+

-

+

-

-

-

-

-

nd

nd

-

-

麥氏弧菌

Y

NG

KK

-

+

+

V

-

V

+

-

-

-

+

+

-

+

+

+

+

-

S

S

+

-

擬態(tài)弧菌

G

NG

KA

+

+

-

-

-

+

-

-

-

-

+

+

+

+

-

-

+

+

S

S

+

-

副溶血弧菌

G

NG

KA

-

+

+

+

-

+

-

V

-

+

+

+

+

-

-

-

+

+

R

S

+

V

創(chuàng)傷弧菌

G

Y

KA

-

+

+

-

-

+

-

+

+

-

+

V

+

+

-

-

+

+

S

S

+

-

嗜水氣單胞菌

Y

NG

KK

+

+

+

-

-

V

V

+

V

V

V

+

+

+

+

+

V

-

R

R

+

-

類志賀鄰單胞

G

NG

nd

+

+

-

-

-

+

-

-

-

-

-

-

+

-

-

+

+

+

S

S

-

-

注:Y:黃色;G:綠色;P:紫色;NG:不生長;nd:不定;K:堿性;A:酸性;a:微酸;+80%以上陽性;

-80%以上陰性;V:不同的菌株反應(yīng)不同;S:敏感;R:抗性

3、霍亂弧菌、副溶血弧菌、創(chuàng)傷弧菌的部分生長和耐熱參數(shù)

4. 霍亂弧菌、副溶血弧菌、創(chuàng)傷弧菌的部分生長和耐熱參數(shù)

參數(shù)

 

 

菌名

生長參數(shù)

熱致死參數(shù)

最低

溫度

最高

溫度

最小

pH

最大

pH

最小

QW

最大

含鹽量

溫度

D

介質(zhì)

UC

UF

霍亂弧菌

N/A

45

N/A

10

N/A

6

60

140

2.65

蟹肉

副溶血弧菌

5

44

4.5

11

0.937

10

49

122

1.15

鹽溶液

創(chuàng)傷弧菌

10

N/A

4.5

N/A

N/A

8

       

 

三、致病性弧菌的檢測方法

1、具有代表性檢驗方法簡介

(1)、FDA的細菌學(xué)分析手冊

  霍亂、付弧、創(chuàng)傷弧菌和其他弧菌(1995 1998修訂)分別著重介紹了霍亂弧菌、副溶血弧菌、創(chuàng)傷弧菌的方法。

  用PCR方法檢測產(chǎn)腸毒素的霍亂弧菌敘述了霍亂腸毒素(cholera Toxin (T)基因

(2)、AOAC官方分析方法

  牡蠣中的霍亂弧菌:升溫富集法(1995.a)

  創(chuàng)傷弧菌的脂肪酸氣相色譜鑒定法(AOAC.1995.b)

  美國midi公司生產(chǎn)的shelock微生物鑒定系統(tǒng)。

(3)、ISO方法

  副溶血弧菌的檢測方法(ISO8914:1990E)

(4)、NMKL

  食品中致病性弧菌的檢測和計數(shù)(NMKL N0156)介紹了霍亂弧菌、副溶血弧菌、創(chuàng)傷弧菌、溶藻弧菌的檢測程序。

(5)、不同國家的方法

  日本、瑞士等國均有相應(yīng)檢驗方法。

2、致病性弧菌的檢測方法

  以上介紹的方法均是以單一或少數(shù)目標菌(NMKL為四種)為目的的設(shè)計的程序。鑒于國外對出口食品中多種致病性弧菌的要求和重視,
有必要探討“同一程序同時檢測多種弧菌”方法。

 

  檢驗程序

  25g樣品+225mL APW(1% NacL pH9.0)

增菌 ↓37℃8-16h

取10mL加入雙倍APW

↓37℃6-8h

選擇 選擇培養(yǎng)基 TCBS

(霍利斯用非選擇性的羊血球瓊脂)

↓37℃24h

定弧菌 取黃色或綠色菌落做G染色、氧化酶、動力、

↓ O/129(150ug)、D-甘露糖

分組 初步鑒定:0% NacL , 1% NacL、硝酸鹽還原、精氨酸雙水解酶、賴氨酸脫羧、鳥氨酸脫羧、 (氧化酶)
分成5組

確證 最后鑒定

編輯:foodadmin

 
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