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【學(xué)習(xí)筆記】GB 5749生活飲用水微生物指標(biāo)——菌落總數(shù)解讀

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-02-26
核心提示: GB 5749-2022生活飲用水指標(biāo)解讀  微生物指標(biāo) GB 5749-2022 規(guī)定的常規(guī)檢驗(yàn)微生物指標(biāo)共3項(xiàng),總大腸菌群、大腸埃
 GB 5749-2022
生活飲用水
指標(biāo)解讀  微生物指標(biāo)

 

GB 5749-2022 規(guī)定的常規(guī)檢驗(yàn)微生物指標(biāo)共3項(xiàng),總大腸菌群、大腸埃希氏菌、菌落總數(shù)。

其中水中菌落總數(shù)可作為評(píng)價(jià)水質(zhì)清潔程度和考核凈化效果

大腸菌群指示水體是否存在腸道傳染病的可能性

總大腸菌群主要包括4個(gè)菌屬:埃希氏菌屬、檸檬酸菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬這些菌屬可以在人、畜糞便中檢出,有的也可以在營(yíng)養(yǎng)豐富的水體中檢出,即在非糞便污染的情況下,也有檢出這些細(xì)菌的可能性。耐熱大腸菌群和總大腸菌群組成相同,但主要組成是埃希菌屬,在此菌屬中與人類生活密切相關(guān)的僅有一個(gè)種,即大腸埃希氏菌。檸檬酸菌屬、克雷伯菌屬和腸桿菌屬所占數(shù)量較少。作為糞便污染的指示菌,大腸埃希氏菌檢出的意義最大,其次是糞大腸菌群,總大腸菌群的衛(wèi)生學(xué)意義稍遜一些。

PART.1

檢測(cè)依據(jù)





GB/T 5750.2-2023《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 第2部分:水樣的采集與保存》

GB/T 5750.12-2023《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 第12部分:微生物指標(biāo)》 

PART.2

水樣采集





一、采樣容器

潔凈磨口硬質(zhì)玻璃瓶;潔凈聚乙烯瓶(桶或袋);也可以使用符合要求的一次性采樣袋或采樣瓶。

 

二、采樣容器的洗滌

  1. 容器洗滌:將容器用自來水和洗滌劑洗滌,并用自來水徹底沖洗后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的硝酸(或鹽酸)浸泡8h以上,然后依次用自來水和純水洗凈。

  2. 容器滅菌:可采用干熱或高壓蒸汽滅菌兩種。干熱滅菌要求160℃下維持2h;高壓蒸汽滅菌要求121℃下維持15min,高壓蒸汽滅菌后的容器如不立即使用,應(yīng)置于60℃烘箱內(nèi)將瓶?jī)?nèi)冷凝水烘干。滅菌后的容器應(yīng)在2周內(nèi)使用。

三、采樣要求

  1. 無菌操作。

  2. 不應(yīng)用水樣蕩洗已滅菌的采樣瓶或采樣袋 。

  3. 避免手指和其他物品對(duì)瓶口或袋口的玷污。

  4. 自來水水樣:先將水龍頭用火焰燒灼3min滅菌再開放水龍頭使水流5min(經(jīng)常用水的水龍頭放水1-3min)后,采集水樣。

  5. 水源水水樣:選有代表性的地點(diǎn)及可疑地方,一般距水面下10-15cm采集,采樣后在水中蓋好蓋子,再?gòu)乃腥〕觥?br style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;" />

  6. 從速送檢,在0~4℃下保存,水樣從采集到檢驗(yàn)不應(yīng)超過8h。

PART.3.1

項(xiàng)目測(cè)定:菌落總數(shù)





一、概念

  1. 菌落:指細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上發(fā)育而形成的能被肉眼所識(shí)別的生長(zhǎng)物,它是由數(shù)以萬計(jì)的相同細(xì)菌聚集而成的,故又有細(xì)菌集落之稱。

  2. 菌落總數(shù):在一定條件下,經(jīng)一定時(shí)間培養(yǎng)后所得1mL水樣中微生物菌落個(gè)數(shù)。

二、意義

  1. 水中菌落總數(shù)可作為評(píng)價(jià)水質(zhì)清潔程度和考核凈化效果的指標(biāo)。

  2. 菌落總數(shù)增多說明水體已被污染,但不能說明污染來源,也不能說明該水體傳播傳染病的風(fēng)險(xiǎn)程度。因此,必須結(jié)合總大腸菌群來判斷水質(zhì)污染的來源和安全程度。

三、測(cè)定方法——平皿計(jì)數(shù)法 

  1. 原理:1mL水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上、在有氧條件下36℃±1℃培養(yǎng)48h后,所得1mL水樣中的菌落總數(shù)的方法。

  2. 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

    成分:蛋白胨10g;牛肉膏3g;氯化鈉5g;瓊脂10~20g;純水1000mL

    制法:將上述成分混合后,加熱溶解,調(diào)整pH為7.4~7.6,分裝于玻璃容器中,經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌20min0~4℃冷藏保存。

  3. 實(shí)驗(yàn)步驟

    生活飲用水

    以無菌操作方法用無菌吸管或移液器吸取1mL充分混勻的水樣,注入無菌平皿中,傾注約15mL已融化并冷卻到45℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,并立即旋搖平皿,使水樣與培養(yǎng)基充分混勻,每次檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)做一平行接種,同時(shí)另用一個(gè)平皿只傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。

    待冷卻凝固后,翻轉(zhuǎn)平皿,使底面向上,置于36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h±2h,進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),即為1mL水樣中的菌落總數(shù)。

     

    水源水

    以無菌操作方法用無菌吸管或移液器吸取1mL充分混勻的水樣,注入盛有9mL無菌生理鹽水的試管中,混勻成1:10稀釋液;

    用無菌吸管或移液器吸取1:10的稀釋液1mL注入盛有9mL無菌生理鹽水的試管中,混勻成1:100稀釋液;

    按同法依次稀釋成1:1000、1:10000等稀釋度的液體備用。每稀釋一個(gè)稀釋度,應(yīng)更換一次1mL無菌吸管或吸頭。

    用無菌吸管或移液器吸取2個(gè)~3個(gè)適宜稀釋度的水樣1mL,分別注入無菌平皿內(nèi)。以下操作同生活飲用水的檢驗(yàn)步驟。


  4. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

    結(jié)果報(bào)告:可用眼睛直接觀察,必要時(shí)用放大鏡檢查,以防遺漏。

     

    同一稀釋度,若其中一個(gè)平皿有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以無片狀菌落生長(zhǎng)的平皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù);若片狀菌落不到平皿的一半,而其余一半菌落數(shù)分布又很均勻,則可將此半皿計(jì)數(shù)后×2以代表全皿菌落數(shù)。然后再求得該稀釋度的平均菌落數(shù)。

    不同稀釋度的選擇及報(bào)告方法,見下表。

     





 

 

四、測(cè)定方法——酶底物法

  1. 原理:

    利用復(fù)合酶技術(shù),在培養(yǎng)基中加入多種獨(dú)特的酶底物,每一種酶底物都針對(duì)不同的細(xì)菌酶設(shè)計(jì),且包含最常見的介水傳播的細(xì)菌,所有的酶底物在被分解時(shí)均產(chǎn)生相同的信號(hào)。水樣檢測(cè)過程中,水樣中存在的細(xì)菌分解一種或者多種酶底物,之后產(chǎn)生一個(gè)相同的信號(hào),在檢測(cè)菌落總數(shù)時(shí),這個(gè)信號(hào)即為在波長(zhǎng)366 nm紫外燈下所產(chǎn)生的熒光。使用基于復(fù)合酶底物技術(shù)(Multiple Enzyme Technology)的培養(yǎng)基,其中酶底物被微生物的酶水解﹐在36℃士1℃下培養(yǎng)48 h后能夠最大限度地釋放4-甲基傘形酮,4-甲基傘形酮在366 nm紫外燈照射下發(fā)出藍(lán)色熒光,對(duì)呈現(xiàn)藍(lán)色熒光的培養(yǎng)盤孔槽計(jì)數(shù)并查閱MPN表,可以確定原始水樣中最可能的菌落總數(shù)。

    本方法未稀釋水樣的檢測(cè)范圍<738 MPN/mL

     

  2. 復(fù)合酶底物培養(yǎng)基

     

    成分:

    a) 葡萄糖                 1.25 g

    b)無水硫酸鎂              0.2 g

    c) 蛋白胨                 5.0 g

    d) 酵母提取物              3.5 g

    e) 4-甲基傘形酮磷酸酯         0.037 5 g

    f)4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖苷    0.03 g

    g)純水                 l 000 mL

     

    制法:將上述成分溶解于純水中,調(diào)整pH為6.7~7.3,經(jīng)0.22 um濾膜過濾除菌。制備好的培養(yǎng)基于2℃~8℃條件下保存?zhèn)溆谩?/span>

     

  3. 實(shí)驗(yàn)步驟

    水樣稀釋:
    檢測(cè)所需水樣為l mL。若水樣污染嚴(yán)重,可對(duì)水樣進(jìn)行稀釋。以無菌操作方法用無菌吸管或移液器吸取1 mL充分混勻的水樣,注入盛有9 mL無菌生理鹽水的試管中,充分振蕩混勻后取1 mL進(jìn)行檢測(cè),必要時(shí)可加大稀釋度,以10倍逐級(jí)稀釋。

    接種培養(yǎng):
    向一無菌試管中加入9 ml制備好的液體培養(yǎng)基;如選用符合要求的成品培養(yǎng)基,則向裝有0.l g培養(yǎng)基的試管中加入9 mL無菌生理鹽水。取1 mL水樣加入上述試管中,渦旋振蕩混勻。
    將混勻后的水樣倒入培養(yǎng)盤中心位置,將培養(yǎng)盤蓋好,放置在水平桌面上﹐緊貼桌面順時(shí)針輕柔晃動(dòng)培養(yǎng)盤,將待測(cè)水樣分配到培養(yǎng)盤的所有孔槽中。
    將培養(yǎng)盤90°~120°豎起,使多余的水樣由盤內(nèi)海綿條吸收,將培養(yǎng)盤緩慢翻轉(zhuǎn)過來,倒置放于36 ℃士1℃培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)48 h。可疊放培養(yǎng),不宜超過10層。

     

  4. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

    結(jié)果計(jì)數(shù)
    將培養(yǎng)后的培養(yǎng)盤取出,倒置于暗處或紫外燈箱內(nèi),在6 W 366 nm紫外燈下約13 cm處觀察﹐記錄產(chǎn)生藍(lán)色熒光的孔數(shù)。如未放置在紫外燈箱內(nèi),觀察時(shí)需佩戴防紫外線的護(hù)目鏡。培養(yǎng)盤中的84個(gè)孔,無論熒光強(qiáng)弱,只要呈現(xiàn)藍(lán)色熒光即為陽性,但海綿條的熒光不計(jì)入結(jié)果。

     

    結(jié)果報(bào)告
    根據(jù)顯藍(lán)色熒光的孔數(shù),對(duì)照表⒉查出孔數(shù)對(duì)應(yīng)的每毫升樣品中的菌落總數(shù)的MPN值。如果樣品進(jìn)行了稀釋,讀取的結(jié)果應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)并報(bào)告之,結(jié)果以MPN/mL表示。如果所有孔均未顯熒光,則可報(bào)告為菌落總數(shù)未檢出。

     


     

    不同稀釋度的選擇及報(bào)告方法
    選擇菌落總數(shù)在<738 MPN/mL.范圍內(nèi)的稀釋度﹐如果只有一個(gè)稀釋度的結(jié)果符合此范圍,則將結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告結(jié)果。

    若有兩個(gè)或兩個(gè)以上稀釋度的結(jié)果均落在<738 MPN/mL,范圍內(nèi),則選擇稀釋度最小的結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告結(jié)果。

    若所有稀釋度的培養(yǎng)盤上均無藍(lán)色熒光,則以未檢出報(bào)告結(jié)果。

 

五、指標(biāo)限值

菌落總數(shù) :100MPN/mL或CFU/mL,(小型集中式供水和分散供水因水源與凈水技術(shù)受限時(shí),菌落總數(shù)指標(biāo)限值按500MPN/mL或CFU/mL執(zhí)行)。

編輯:songjiajie2010

 
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