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【檢測(cè)技能】菌落總數(shù)檢測(cè)及操作基礎(chǔ)細(xì)節(jié)匯總

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-08-04
核心提示: 菌落總數(shù)所使用標(biāo)準(zhǔn)食品企業(yè)一般會(huì)用到的兩個(gè)做菌落總數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)。(當(dāng)然還有其他標(biāo)準(zhǔn))食品國(guó)家標(biāo)準(zhǔn):GB 4789.2-2016 《食品
 菌落總數(shù)所使用標(biāo)準(zhǔn)

 

食品企業(yè)一般會(huì)用到的兩個(gè)做菌落總數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)。(當(dāng)然還有其他標(biāo)準(zhǔn))

 

食品國(guó)家標(biāo)準(zhǔn):

GB 4789.2-2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》


生產(chǎn)用水:

GB/T 5750.12-2006 《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法微生物指標(biāo)》

 

2
檢測(cè)流程

3
操作方法/步驟

 

1、進(jìn)行操作時(shí)必須將酒精燈與平皿保持在同一條直線上,操作時(shí)必須在酒精燈與人體之間進(jìn)行。

2、做樣時(shí)先將樣品進(jìn)行搖勻。

3、樣品開口后迅速過(guò)火焰

4、手持吸管做樣時(shí)吸管的尖部不允許接觸任何其他部λ將吸頭插入吸管時(shí),手持吸管上部無(wú)刻度處并迅速過(guò)火焰。ÿ做一個(gè)稀釋度必須更換一支吸管。做樣時(shí)超凈臺(tái)要開啟無(wú)菌風(fēng)。

5、搖皿時(shí),手部盡量向下用力,培養(yǎng)基不會(huì)溢出。左三圈,右三圈。

 

4
操作注意細(xì)節(jié)

 

1 菌落總數(shù)是比較常規(guī)的微生物檢測(cè)項(xiàng)目,也是比較容易做的一個(gè)微生物檢測(cè)方法,主要注意無(wú)菌操作,與稀釋液均勻性。

 

2 在空白出現(xiàn)菌落的時(shí)候需要去分析哪一步出現(xiàn)問(wèn)題,人機(jī)料法環(huán)。當(dāng)然空白出現(xiàn)菌落的時(shí)候,那ô該批次的菌落總數(shù)數(shù)據(jù)都作廢處理。在制樣和做樣的時(shí)候需要在百級(jí)的環(huán)境(百級(jí)的潔凈工作臺(tái))下進(jìn)行。

 

3 稀釋液的均勻性,這個(gè)會(huì)影響結(jié)果,剛開始的時(shí)候可能會(huì)造成同一梯度的兩個(gè)結(jié)果相差有點(diǎn)遠(yuǎn),這個(gè)是因?yàn)樽龅臅r(shí)候û有把稀釋液均勻。如果前后兩個(gè)梯度û有梯度性,那ô就是在做稀釋做不好。這個(gè)都是靠多做,技術(shù)才會(huì)提高。(當(dāng)然還有一種情況,樣品是中添加了抑菌物質(zhì),這樣û有梯度性。)

 

5
計(jì)數(shù)

 

1.可用肉眼觀察,必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器,記¼稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單λ(colony-formingunits , CFU )表示。

 

2.選取菌落數(shù)在 30CFU~300CFU 之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于 30CFU的平板記¼具體菌落數(shù),大于 300CFU 的可記¼為多不可計(jì)。ÿ個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。

 

3.其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2,代表一個(gè)平板菌落數(shù)。(這個(gè)是很多新手會(huì)問(wèn)的一個(gè)問(wèn)題)

 

4.當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界線的鏈狀生長(zhǎng)時(shí),則將ÿ條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。

 

計(jì)數(shù)(標(biāo)準(zhǔn)中介紹)

1.若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范Χ內(nèi),計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值,再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),作為ÿ g ( mL )樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。

 

2.若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范Χ內(nèi)時(shí),按式( 1 )計(jì)算:

3.若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于 300CFU,則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),其他平板可記¼為多不可計(jì),結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。

 

4.若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于 30CFU,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。

 

5.若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無(wú)菌落生長(zhǎng),則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。

 

6.若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在 30CFU~300CFU 之間,其中一部分小于 30CFU 或大于300CFU 時(shí),則以最接近 30CFU 或 300CFU 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。

 

6
菌落總數(shù)的問(wèn)題(是一些新手問(wèn)的問(wèn)題)

 

1.有新人可能會(huì)拿著菌落總數(shù)的平板去問(wèn)別人這是什ô菌?

答:這是看不出來(lái)的,菌落總數(shù)只能檢測(cè)出樣品衛(wèi)生情況,一個(gè)樣品的細(xì)菌數(shù)量,不能驗(yàn)證出什ô菌。這是一個(gè)不應(yīng)該犯的誤區(qū)。

 

2.若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在 30CFU~300CFU 之間,其中一部分小于 30CFU 或大于300CFU 時(shí)。就會(huì)有人不知道怎ô去判定那個(gè)梯度更接近30-300。

舉例:一個(gè)梯度:28/28;另梯度:305/305,那ô那個(gè)數(shù)據(jù)更接近呢?

兩個(gè)方法(網(wǎng)友提供):

a、按標(biāo)準(zhǔn)字面意思直接做差比較后再乘以稀釋倍數(shù):28-30=-2,他們相差2;305-300=5,他們相差5。2比5要小,那ô采取28相應(yīng)的梯度再乘以稀釋倍數(shù);

b、恢復(fù)為同稀釋度做差比較:把兩個(gè)梯度換算成同一個(gè)梯度,一般把28換算成280。280-300=-20,相差20;305-300=5,相差5。20比5要大,那ô采取305相應(yīng)的梯度。

(個(gè)人意見:我是更偏向于第二種,因?yàn)橐谕粋(gè)梯度上做比較才能體現(xiàn)出數(shù)據(jù)的可靠性,同時(shí)我偏向采用前一個(gè)梯度的數(shù)字,那ô這個(gè)數(shù)值可以減少一步步驟帶來(lái)的誤差,數(shù)據(jù)可能更加接近樣品的情況)

 

3.有時(shí)候會(huì)出現(xiàn)這ô一個(gè)情況,最低稀釋梯度中一個(gè)平板出現(xiàn)1個(gè)菌落,另一個(gè)無(wú)菌落生長(zhǎng)。那ô結(jié)果怎ô出呢?

答:(以固態(tài)為例子)在過(guò)去也有討論過(guò),有人認(rèn)為報(bào)告寫5,也有認(rèn)為報(bào)告寫<10(比較兩個(gè)平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)的時(shí)候報(bào)<10)這個(gè)兩個(gè)報(bào)告方法其實(shí)也是可以采用。(我是采用第一種;個(gè)人理解不長(zhǎng)報(bào)告<10,那ô長(zhǎng)了也報(bào)<10嗎?不太合理)

 

4.在做菌落總數(shù)的時(shí)候,有時(shí)候會(huì)樣品和菌落分不清的(老前輩不會(huì)這樣),那ô如何區(qū)分兩種物質(zhì)呢?

答:在培養(yǎng)基中添加TTC(一般2%濃度1mL加到400mL的培養(yǎng)基中,TTC的濃度不要過(guò)高,會(huì)有抑制作用)。TTC的原理:TTC和活細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫ø反應(yīng),生成紅色的甲月贊。那ô生長(zhǎng)的菌落會(huì)變成紅色,這樣就可以區(qū)分菌落與樣品。

還有一個(gè)方法:4℃冷藏保存一個(gè)樣品和培養(yǎng)基混勻的平板做對(duì)照,觀察菌落的形態(tài)特征,老前輩們基本靠這個(gè)去區(qū)分的。

 

5、菌落總數(shù)計(jì)數(shù)包括ù菌嗎?

答:菌落總數(shù)的概念是這ô規(guī)定的,食品檢樣經(jīng)過(guò)處理,在一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間等)培養(yǎng)后,所得ÿg(mL)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。所以也包括在PCA上生長(zhǎng)的ù菌和酵母等微生物。

 

6、培養(yǎng)基溫度不好控制?

答:前提是培養(yǎng)基滅菌好了放在水浴鍋內(nèi)保溫46攝氏度。使用時(shí)一個(gè)同事在外面把培養(yǎng)基從水浴鍋拿到傳遞窗,培養(yǎng)基表面噴酒精殺菌,然后開啟傳遞窗的紫外燈5min(這一步是對(duì)培養(yǎng)基表面殺菌,減少對(duì)潔凈房的污染)。里面的同事5min之后拿起來(lái)放在手心人體不覺燙手,這樣的溫度最佳倒平板。(注意:倒平板的速度要快,一次最好只拿一瓶,避免培養(yǎng)基凝固)

 

7、有些朋友不理解菌落總數(shù)的單λCFU的意思。

答:CFU為Colony-Forming Units英文縮寫,其含義是形成菌落的菌落個(gè)數(shù),不等于細(xì)菌個(gè)數(shù)。(比如兩個(gè)相同的細(xì)菌靠得很近或貼在一起,那ô經(jīng)過(guò)培養(yǎng)這兩個(gè)細(xì)菌將會(huì)形成一個(gè)菌落,此時(shí)就是2個(gè)細(xì)菌,1CFU)。菌落總數(shù)往往采用的是平板計(jì)數(shù)法,經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后我們數(shù)出平板上所生長(zhǎng)出的菌落個(gè)數(shù),從而計(jì)算出ÿ毫升或ÿ克待檢樣品中可以培養(yǎng)出多少個(gè)菌落,于是以CFU/ml或CFU/g報(bào)告之。

 

8、菌落超標(biāo)的Σ害。

答:食品的菌落總數(shù)嚴(yán)重超標(biāo),說(shuō)明其產(chǎn)品的衛(wèi)生狀況達(dá)不到基本的衛(wèi)生要求,將會(huì)破壞食品的營(yíng)養(yǎng)成分,加速食品的腐敗變質(zhì),使食品失去食用價(jià)值。消費(fèi)者食用微生物超標(biāo)嚴(yán)重的食品,很容易患痢疾等腸道疾病,可能引起嘔吐、腹瀉等癥狀,Σ害人體健康安全。


但需要強(qiáng)調(diào)的是,菌落總數(shù)和致病菌有本質(zhì)區(qū)別,菌落總數(shù)包括致病菌和有益菌,對(duì)人體有損害的主要是其中的致病菌,這些病菌會(huì)破壞腸道里正常的菌落環(huán)境,一部分可能在腸道被殺滅,一部分會(huì)留在身體里引起腹瀉、損傷肝臟等身體器官,而有益菌包括酸奶中常被提起的乳酸菌等。但菌落總數(shù)超標(biāo)也意ζ著致病菌超標(biāo)的機(jī)會(huì)增大,增加Σ害人體健康的幾率。

 

9、培養(yǎng)后的培養(yǎng)基出現(xiàn)干裂情況。

答:干裂是由于培養(yǎng)基里面的水份缺失導(dǎo)致,所以當(dāng)出現(xiàn)干裂情況,先要觀察干裂平板的數(shù)量和λ置?词欠袷桥囵B(yǎng)箱內(nèi)部溫度不穩(wěn)定導(dǎo)致(一般平皿一疊可以放置六個(gè),同時(shí)要注意ÿ疊之間需要保留一點(diǎn)間隙讓其通風(fēng));排除儀器的原因之后,看是培養(yǎng)基否倒得太薄(初學(xué)者可以拿三角瓶裝水進(jìn)行練習(xí));還有其他原因,其實(shí)在出現(xiàn)干裂的情況下,結(jié)果是無(wú)效的(除非干裂情況不嚴(yán)重)。排查出問(wèn)題所在,可以避免我們下次再犯錯(cuò)。

 

10、培養(yǎng)基的配置。

答:培養(yǎng)基的包裝上(標(biāo)準(zhǔn)上)都會(huì)寫著先煮熱溶解再分裝,那ô是不是一定要煮熱溶解呢?首先瓶子上的配置方法是直接配置一升的PCA,這里是必須要煮熱溶解(防止不均勻,使得部分培養(yǎng)基不凝固)。


其實(shí)配置培養(yǎng)基有兩個(gè)方法:第一個(gè):用一個(gè)大容器配置培養(yǎng)基,然后加水煮熱溶解(注意攪拌,防止燒焦),待溶解完成之后進(jìn)行分裝(這里需要注意安全),再去滅菌。第二個(gè)方法就是使用500mL三角瓶(其他容器也可以)配置300ml的培養(yǎng)基,加水稍微溶解(此步不需要加熱),再拿去滅菌。

編輯:songjiajie2010

 
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