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控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2020-09-23
核心提示:控制菌檢查用成品培養(yǎng)基、脫水培養(yǎng)基或按培養(yǎng)基處方配置的培養(yǎng)基均應(yīng)檢查。檢查項目包括培養(yǎng)基的促生長能力、指示和抑制特性能力
 控制菌檢查用成品培養(yǎng)基、脫水培養(yǎng)基或按培養(yǎng)基處方配置的培養(yǎng)基均應(yīng)檢查。檢查項目包括培養(yǎng)基的促生長能力、指示和抑制特性能力。

 

適用性檢查試驗菌株

 

大腸埃希菌[CMCC(B)44102]

金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]

銅綠假單胞菌[CMCC(B)10104]

乙型副傷寒沙門菌[CMCC(B)50094]

白色念珠菌[CMCC(F)98001]

枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]

菌株培養(yǎng)基菌液制備同微生物限度檢查方法驗證。

各種培養(yǎng)基需要測試的能力及判斷指標

液體培養(yǎng)基促生長能力檢查:取不大于100CFU的試驗菌株分別接種于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中,在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度(30~35℃)及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。與對照培養(yǎng)基比較,被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好,表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁。

固體培養(yǎng)基促生長能力檢查:取試驗菌液0.1mL(含菌數(shù)50~100CFU)分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基上,在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度(30~35℃)及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。與對照培養(yǎng)基比較,被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基上生長的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。

 

液體培養(yǎng)基指示能力檢查:取不大于100CFU的試驗菌株分別接種于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中,在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度(30~35℃)及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。與對照培養(yǎng)基管比較,被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長情況/指示劑反應(yīng)等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。

 

固體培養(yǎng)基指示能力檢查:取試驗菌液0.1mL(含菌數(shù)50~100CFU)分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基上,在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度(30~35℃)及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基上試驗菌的菌落形態(tài)特征、菌落顏色及指示劑反應(yīng)情況應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。

 

培養(yǎng)基抑制能力檢查:取不大于100CFU的試驗菌株分別接種于液體被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基,取試驗菌液0.1mL(不大于100CFU)分別涂布于固體被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基,在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度(30~35℃)及最長培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。試驗菌應(yīng)不得生長。


控制菌檢查用培養(yǎng)基能力測試列表


控制菌檢查涉及的21種培養(yǎng)基,特點各異。表格中概述培養(yǎng)基檢查的具體項目,具體操作程序在其后說明。

控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查項目、菌株及判斷指標



各控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查實驗操作

控制菌檢查用培養(yǎng)基較多,特點各不相同。為避免培養(yǎng)基配制過程出現(xiàn)遺漏,此處特別提示以下幾個需要特殊注意的培養(yǎng)基:

不可高壓滅菌只能加熱煮沸的培養(yǎng)基3種:DHL瓊脂、SS瓊脂和念球菌顯色培養(yǎng)基;

需添加試劑的培養(yǎng)基3種:TTB培養(yǎng)基、亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基和哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基。


各培養(yǎng)基適用性檢查的具體操作過程

1 膽鹽乳糖培養(yǎng)基

新鮮配制100mL/瓶的對照膽鹽乳糖培養(yǎng)基4瓶,121℃滅菌15min,備用。分別接種大腸埃希菌、銅綠假單胞菌以及金黃色葡萄球菌各1瓶,接種菌液量1mL(不大于100CFU),另一瓶不接種菌作為空白對照;被檢培養(yǎng)基同法操作,置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較,被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好,表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁;培養(yǎng)48h,空白培養(yǎng)瓶和接種金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁;

 

2 MUG培養(yǎng)基

新鮮配制50mL/瓶的對照MUG培養(yǎng)基4瓶,121℃滅菌15min,備用。接種大腸埃希菌2支,接種菌液0.2mL(不大于100CFU),另一支不接種菌作為空白對照,培養(yǎng)5h,在366nm紫外光燈下觀察結(jié)果;被檢培養(yǎng)基同法操作,置規(guī)定溫度培養(yǎng)?瞻着囵B(yǎng)基應(yīng)不得渾濁,且366nm處觀察無熒光;與對照培養(yǎng)基比較,被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好,表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁,366nm處應(yīng)呈熒光。若熒光不明顯,則可延長至24h觀察。

 

3 曙紅亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基(EMB)

新鮮配制對照EMB瓊脂培養(yǎng)基,121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)8h后備用。取5個無菌EMB瓊脂平板,分別涂布接種大腸埃希菌和乙型副傷寒沙門菌各2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng);被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h,被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致;培養(yǎng)24h,空白平板應(yīng)無菌落生長。

 

4 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基

新鮮配制對照麥康凱瓊脂培養(yǎng)基121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)8h后備用。取5個無菌麥康凱瓊脂平板,分別涂布接種大腸埃希菌和乙型副傷寒沙門菌各5皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng);被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h,被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致;培養(yǎng)24h,空白平板應(yīng)無菌落生長。

 

5 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基

新鮮配制10mL/支的對照乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基,121℃滅菌15min,備用。取5支,分別接種大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌,各2支,接種菌液量1mL(不大于100CFU),另一支不接種菌作為空白對照;被檢培養(yǎng)基同法操作,置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較,被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好,表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變色、渾濁,且有導(dǎo)管中應(yīng)有明顯的產(chǎn)氣現(xiàn)象;培養(yǎng)24h,空白培養(yǎng)管和接種金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)管應(yīng)不得變色、不得渾濁。

 

6 乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基

新鮮配制10mL/支的對照乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基,121℃滅菌15min,備用。取3支,接種大腸埃希菌2支,接種菌液量1mL(不大于100CFU),另一支不接種菌作為空白對照;被檢培養(yǎng)基同法操作,置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較,被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好,表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變色、渾濁,且有導(dǎo)管中應(yīng)有明顯的產(chǎn)氣現(xiàn)象;培養(yǎng)24h,空白培養(yǎng)管應(yīng)不得變色、不得渾濁。

 

7 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基

新鮮配制100mL/瓶的對照營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基3瓶,121℃滅菌15min,備用。分別接種乙型副傷寒沙門菌和金黃色葡萄球菌各1瓶,接種菌液量1mL(不大于100CFU),另一瓶不接種菌作為空白對照;被檢培養(yǎng)基同法操作,置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較,被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好,表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁;培養(yǎng)48h,空白培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁。

 

8 四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基(TTB)

新鮮配制10mL/支的對照四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基基礎(chǔ),121℃滅菌15min,備用。臨用前,無菌操作加入0.2ml碘試液和0.1mL亮綠試液。取5支,分別接種乙型副傷寒沙門菌和金黃色葡萄球菌各2支,接種菌液1mL(不大于100CFU),另一支不接種菌作為空白對照;被檢培養(yǎng)基同法操作,置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較,被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好,表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基上清渾濁;培養(yǎng)24h,空白培養(yǎng)管和接種金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)管應(yīng)不得渾濁。

由于TTB中的碳酸鈣對渾濁現(xiàn)象觀察有影響,因此若渾濁現(xiàn)象不明顯,則將各培養(yǎng)物接種至膽鹽硫乳瓊脂(DHL)或沙門、志賀屬瓊脂(SS)平板上劃線觀察TTB培養(yǎng)物生長情況,空白對照和接種金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)管劃線后應(yīng)無菌落生長,對照和被檢TTB培養(yǎng)基劃線接種至瓊脂平板后應(yīng)有菌落生長、且顏色形態(tài)一致。

 

9 膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基(DHL)

新鮮配制對照DHL瓊脂培養(yǎng)基,加熱充分溶解,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個無菌DHL瓊脂平板,涂布接種乙型副傷寒沙門菌2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng);被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h,被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致;培養(yǎng)48h,空白平板應(yīng)無菌落生長。

 

10 沙門、志賀屬瓊脂培養(yǎng)基(SS)

新鮮配制對照SS 瓊脂培養(yǎng)基,加熱充分溶解,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個無菌SS 瓊脂平板,涂布接種乙型副傷寒沙門菌2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng);被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h,被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致;培養(yǎng)48h,空白平板應(yīng)無菌落生長。

 

11 溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)

新鮮配制對照溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基,121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取7個無菌瓊脂平板,分別涂布接種銅綠假單胞菌和大腸埃希菌各3皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng);被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h,被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致;培養(yǎng)24h,空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。


12 綠膿菌素測定用培養(yǎng)基(PDP)

新鮮配制對照綠膿菌素測定用培養(yǎng)基基礎(chǔ),每升培養(yǎng)基中加入10mL甘油,121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個無菌綠膿菌素測定用瓊脂平板,涂布接種銅綠假單胞菌2皿,接種菌液0.1ml(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)24h;被檢培養(yǎng)基同法操作。空白平板應(yīng)無菌落生長,被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。

 

13 亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基

新鮮配制100mL/瓶的對照營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基3瓶,121℃滅菌15min,備用。臨用前,加入新鮮配制的無菌1%亞碲酸鹽0.2mL。分別接種金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各1瓶,接種菌液1ml(不大于100CFU),另一瓶不接種菌株作為空白對照;被檢培養(yǎng)基同法操作,置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較,被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好,表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變黑、變渾濁;培養(yǎng)48h,空白培養(yǎng)瓶和接種大腸埃希菌的培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁。

 

14 卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基

新鮮配制對照卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ),121℃滅菌15min,冷卻至60℃,參照2020版《中國藥典》比例無菌操作加入10%氯化鈉卵黃液,充分振搖后傾注平皿,35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取5個無菌瓊脂平板,分別涂布接金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各2皿,接種菌液0.1ml(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置;被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24h,被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致;培養(yǎng)72h,空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。

 

15 甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基

新鮮配制對照甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基,121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取5個無菌瓊脂平板,分別涂布接種金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置;被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24h,被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致;培養(yǎng)72h,空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。

 

16 梭菌增菌培養(yǎng)基

新鮮配制100mL/瓶的對照梭菌增菌培養(yǎng)基2瓶,121℃滅菌15min,備用。接種生孢梭菌1瓶,接種菌液1mL(不大于100CFU),另一瓶不接種菌株作為空白對照,置規(guī)定溫度的厭氧條件培養(yǎng)48h;被檢培養(yǎng)基同法操作。空白培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁;與對照培養(yǎng)基比較,被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好,表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁。

 

17 哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基

新鮮配制對照哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基,121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個哥倫比亞瓊脂平板,涂布接種生孢梭菌2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后置規(guī)定溫度的厭氧條件下倒置培養(yǎng);被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)48h,空白平板無菌落生長;被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。

哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富,適宜多數(shù)需氧菌的生長,為了消除其它雜菌生長對檢查結(jié)果的影響,可在每升滅菌后培養(yǎng)基中按無菌操作添加含有相當于20mg慶大霉素的硫酸慶大霉素。添加慶大霉素的哥倫比亞瓊脂可參照上述方法進行培養(yǎng)基適用性考察。

 

18 沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基

新鮮配制100mL/瓶的對照沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基2瓶,121℃滅菌15min,備用。接種白色念球菌1瓶,接種菌液量1mL(不大于100CFU),另一瓶不接種菌作為空白對照;被檢培養(yǎng)基同法操作,置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)48h,與對照培養(yǎng)基比較,被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好,表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁;培養(yǎng)72h,空白培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁。

 

19 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基

新鮮配制對照沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基,121℃滅菌15min,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個沙氏葡萄糖瓊脂平板,涂布接種白色念球菌2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng);被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24h,被檢培養(yǎng)基上的菌落大小、形態(tài)特征、顏色及氣味應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致;培養(yǎng)72h,空白平板應(yīng)無菌落生長。

 

20 念球菌顯色培養(yǎng)基

新鮮配制對照念球菌顯色培養(yǎng)基,加熱充分溶解,冷卻至60℃傾注平皿,35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。念球菌顯色平板使用前避光保存,取5個無菌念球菌顯色平板,分別涂布接種白色念球菌和大腸埃希菌各2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng);被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24h,被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致;培養(yǎng)72h,空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。

 

21 1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養(yǎng)基

新鮮配制對照1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ),每升培養(yǎng)基中加入10mL聚山梨酯80,121℃滅菌15min,冷卻至60℃后,傾注平皿, 35℃培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個1%聚山梨酯80-玉米瓊脂平板,涂布接種白色念球菌2皿,接種菌液0.1mL(含菌50~100CFU),另一平板不接種菌作為空白對照,涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng);被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24h,被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及芽管指示能力應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致;培養(yǎng)48h,空白平板應(yīng)無菌落生長。

編輯:songjiajie2010

 
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