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大腸菌群在檢測(cè)過(guò)程中的注意事項(xiàng)分享

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2020-01-06  來(lái)源:食品微生物檢驗(yàn)公眾號(hào)
核心提示:大腸菌群的一些注意事項(xiàng)一 、方法的選擇大腸菌群檢測(cè)的關(guān)鍵在于方法的選用,食品中大腸菌群檢測(cè)有兩種表示方法。1、是以100mL(g)
大腸菌群的一些注意事項(xiàng)
一 、方法的選擇

大腸菌群檢測(cè)的關(guān)鍵在于方法的選用,食品中大腸菌群檢測(cè)有兩種表示方法。
1、是以100mL(g)檢樣內(nèi)大腸菌群最大可能數(shù)(MPN)表示,檢測(cè)方法需使用GB/T 4789.3-2003《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群測(cè)定》;

2、以每g(mL)樣品中大腸菌群的MPN值表示,檢測(cè)方法需使用GB 4789.3-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》。
3、現(xiàn)行食品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的大腸菌群指標(biāo)以“CFU/克或CFU/毫升”為單位的,適用GB 4789.3-2016,故檢測(cè)樣品前需根據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)真選擇方法。
例如,GB/T2717-2003醬油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)大腸菌群的要求需使用方法一GB/T 4789.3-2003。又如GB/T 2718-2014醬油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)大腸菌群的要求需使用方法二GB4789.3-2016。


二、大腸檢測(cè)過(guò)程錦囊知識(shí)分享

1.MPN法:大腸菌群的國(guó)標(biāo)檢驗(yàn)法采用三步法,即乳糖發(fā)酵、分離培養(yǎng)和證實(shí)實(shí)驗(yàn)。
第一步乳糖發(fā)酵試驗(yàn)室樣品的發(fā)酵結(jié)果,不是純菌的發(fā)酵試驗(yàn),所以初發(fā)酵陽(yáng)性管經(jīng)過(guò)后兩步,有可能成為陰性。大量檢驗(yàn)數(shù)據(jù)證明,食品中大腸菌群檢驗(yàn)程序的符合率、初發(fā)酵與證實(shí)試驗(yàn)相差很大,不同食品三步法的符合情況也不一致。

2.平板法:第一做平板法的時(shí)候需要覆蓋第二層培養(yǎng)基,它的作用是:有助于典型菌落形成也為了防止蔓延性細(xì)菌生長(zhǎng)。第二,挑菌,其實(shí)這一步主要怕挑菌的時(shí)候挑不到菌,其實(shí)你可以把帶菌的部分培養(yǎng)基完全挑起來(lái)(不要怕培養(yǎng)基包含著它出不來(lái))放到BGLB內(nèi),然后用手腕力搖一下試管就可以把培養(yǎng)基打碎。
一般來(lái)說(shuō),如果平板上有較多典型大腸菌群菌落,革蘭氏染色為陰性桿菌,即可做出判斷。如果平板上菌落數(shù)較少或不夠典型,則應(yīng)多挑菌落做證實(shí)試驗(yàn),以免出現(xiàn)假陰性。只做一步初發(fā)酵,對(duì)某些食品來(lái)說(shuō)誤差較大。這樣做,會(huì)有相當(dāng)部分的合格樣品被作為不合格樣品處理,應(yīng)予以注意。

3.初發(fā)酵產(chǎn)氣量:在糖發(fā)酵試驗(yàn)中經(jīng)?梢钥吹剑诎l(fā)酵套管內(nèi)存在極小的氣泡(有時(shí)比小米粒還。,類似這種情況能否算是產(chǎn)期陽(yáng)性,這是很多人經(jīng)常遇到的問(wèn)題。大腸菌群的產(chǎn)氣量,多者可以使發(fā)酵套管充滿氣體,少者產(chǎn)生比小米粒還小的氣泡。一般來(lái)說(shuō),產(chǎn)氣量與大腸菌群檢出率呈正相關(guān),但隨樣品種類而有不同,有米粒大小氣泡的也有陽(yáng)性檢出。另外,對(duì)未產(chǎn)氣的乳糖發(fā)酵管是否均應(yīng)做陰性處理,根據(jù)大量時(shí)間工作經(jīng)驗(yàn)來(lái)看,對(duì)這種情況應(yīng)慎重考慮,有時(shí)會(huì)遇到在初發(fā)酵時(shí)產(chǎn)酸無(wú)氣,但復(fù)發(fā)酵卻證實(shí)為大腸桿菌陽(yáng)性。有時(shí)套管內(nèi)雖無(wú)氣體,但在液面及管壁可以看到緩緩上升的小氣泡。所以對(duì)未產(chǎn)氣的發(fā)酵管有疑問(wèn)時(shí),可以用手輕輕敲動(dòng)或搖晃試管,若有氣泡沿管壁上浮,即考慮為有氣體產(chǎn)生,應(yīng)做進(jìn)一步試驗(yàn)觀察。這種情況的陽(yáng)性檢出率可達(dá)半數(shù)以上。

4.復(fù)發(fā)酵是為什么用BGLB呢?
從它的成分蛋白胨、乳糖、牛膽粉、煌綠來(lái)看,蛋白胨提供氮源,乳糖提供碳源并作為指示劑,牛膽粉(oxgall或oxbile)溶液抑制革蘭陽(yáng)性菌生長(zhǎng)煌綠水抑制革蘭陽(yáng)性菌和部分陰性菌生長(zhǎng)。

5.EMB平板(挑選菌落):在檢驗(yàn)方法中我們選用伊紅美藍(lán)平板為分離培養(yǎng)基,在該平板上,大腸菌群菌落大多呈紫黑色有金屬光澤或無(wú)金屬光澤。菌落形態(tài)的其他方面(如菌落的大小、光滑與粗糙、邊緣完整情況、隆起情況、濕潤(rùn)與干燥)雖也應(yīng)注意,但不如色澤方面更為重要。

挑取菌落數(shù)與大腸菌群的檢出率也有密切關(guān)系。在實(shí)際工作由于工作量較大,通常只挑取一個(gè)菌落,但影響大腸菌群檢出率的因素很多,如食品種類、菌落色澤和形態(tài)、細(xì)菌種類等,只挑取一個(gè)菌落,由于幾率問(wèn)題,很難避免假陰性的出現(xiàn),尤其當(dāng)菌落不典型時(shí)。所以,挑取菌落時(shí)一定要挑取典型菌落,若無(wú)典型菌落則應(yīng)多挑取幾個(gè)菌落,以免出現(xiàn)假陰性。

6.MPN檢索表使用
GB/T 4789.3-2003檢索表中陽(yáng)性管數(shù)是以1mL(g)×3、0.1mL(g)×3和0.01mL(g)×3的梯度進(jìn)行表示,GB 4789.3-2016陽(yáng)性管數(shù)是以0.10、0.01和0.001的梯度表示,均按照稀釋倍數(shù)推算結(jié)果,結(jié)果相同。推算方法以GB 4789.3-2016為例,改用1g(mL)、0.1g(mL)和0.01g(mL)時(shí),表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低10倍;如改用0.01g(mL)、0.001g(mL)和0.0001g(mL)時(shí),則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)增高10倍,其余類推即可。
編輯:songjiajie2010

 
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