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稀釋平板測數(shù)法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-09-01
核心提示:一、實驗?zāi)康牧私庀♂屍桨逵嫈?shù)的原理,掌握涂抹平板培養(yǎng)法和混合平板培養(yǎng)法,認識細菌、放線菌、霉菌的菌落特征。二、實驗原

一、實驗?zāi)康?/span>

了解稀釋平板計數(shù)的原理,掌握涂抹平板培養(yǎng)法和混合平板培養(yǎng)法,認識細菌、放線菌、霉菌的菌落特征。

二、實驗原理

    稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落,即是由一個單細胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法,即一個菌落代表一個單細胞。計數(shù)時,首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液,盡量使樣品中的微生物細胞分散開,使成單個細胞存在(否則一個菌落就不只是代表一個細胞),再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中,使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后,由單個細胞生長繁殖形成菌落,統(tǒng)計菌落數(shù)目,即可計算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù),故又稱活菌計數(shù)。一般用于某些成品檢定(如殺蟲菌劑等)、生物制品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。

三、實驗器材   

    1.活材料:蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)菌劑。

2.培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基附錄三、1)

3.器材:90ml無菌水、9ml無菌水、無菌平、lml無菌吸管、天平、稱樣瓶、記號筆、玻璃刮鏟等。

四、實驗方法

    1.樣品稀釋液的制備  準(zhǔn)確稱取待測樣品l0g,放入裝有90ml無菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中,用手或置搖床上振蕩20 min,使微生物細胞分散,靜置20-30s,即成10-1稀釋液;再用1ml無菌吸管,吸取10-1稀釋液lml,移入裝有9ml無菌水的試管中,吹吸3次,讓菌液混合均勻,即成10-2稀釋液;再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1 ml,移入裝有9ml無菌水的試管中,也吹吸三次,即成l0-3稀釋液;以此類推,連續(xù)稀釋,制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液(圖22-1)。

22-1  平板計數(shù)法中樣品的稀釋和稀釋液的取樣培養(yǎng)

用稀釋平板計數(shù)時,待測稀釋度的選擇應(yīng)根據(jù)樣品確定。樣品中所含待測菌的數(shù)量多時,稀釋度應(yīng)高,反之則低。通常測定細菌菌劑含菌數(shù)時,采用10-7、10-8、10-9稀釋度,測定土壤細菌數(shù)量時,采用10-4、10-5、10-6稀釋度,測定放線菌數(shù)量時,采用l0-3、10-4、10-5稀釋度,測定真菌數(shù)量時,采用10-2、10-3、10-4稀釋度。

2.平板接種培養(yǎng)  平板接種培養(yǎng)有混合平板培養(yǎng)法和涂抹平板培養(yǎng)法兩種方法。

    (1)混合平板培養(yǎng)法  將無菌平板編上10-7、10-8、10-9號碼,每一號碼設(shè)置三個重復(fù),用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號10-9的3個平板中,同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號10-8的3個平板中,再吸取10-7稀釋液各lml放入編號10-7的3個平板中(由低濃度向高濃度時,吸管可不必更換)。然后在9個平板中分別倒入已融化并冷卻至45—50℃的細菌培養(yǎng)基(圖22-2),輕輕轉(zhuǎn)動平板,使菌液與培養(yǎng)基混合均勻,冷后倒置,適溫培養(yǎng)。至長出菌落后即可計數(shù)。

2)涂抹平板計數(shù)法  涂抹平板計數(shù)法與混合法基本相同,所不同的是先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中,待凝固后編號,然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上(每個編號設(shè)三個重復(fù))。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻(圖22-3),每個稀釋度用一個滅菌刮鏟,更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時,也可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上20—30min,使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi),然后將平板倒轉(zhuǎn),保溫培養(yǎng),至長出菌落后即可計數(shù)。

五、實驗作業(yè):

  將實驗結(jié)果填入下表中

稀釋度

10-7

10-8

10-9

菌落數(shù)

1

2

3

平均

1

2

3

 平均

1

2

  3

 平均

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1g樣品活菌數(shù)

 

 

 

計算結(jié)果時,常按下列標(biāo)準(zhǔn)從接種后的3個稀釋度中選擇一個合適的稀釋度,求出每克菌劑中的含菌數(shù)。

    (1)同一稀釋度各個重復(fù)的菌數(shù)相差不太懸殊。

    (2)細菌、放線菌、酵母菌以每30—300個菌落為宜,霉菌以每10—100個菌落為宜。

選擇好計數(shù)的稀釋度后,即可統(tǒng)計在平板上長出的菌落數(shù),統(tǒng)計結(jié)果按下式計算。

混合平板計數(shù)法:

每克樣品的菌數(shù)=同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)

涂抹平板計效法:

    每克樣品的菌數(shù)=同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)×10×稀釋倍數(shù)

編輯:foodadmin

 
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關(guān)鍵詞: 稀釋 平板
 

 
 
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