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微生物檢測中常用的細(xì)菌接種方法匯總!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-07-09
核心提示: 常用的細(xì)菌接種方法有平板劃線分離法、斜面接種法、穿刺接種法、液體和半固體接種法、涂布接種法等。一、平板劃線分離法平
 常用的細(xì)菌接種方法有平板劃線分離法、斜面接種法、穿刺接種法、液體和半固體接種法、涂布接種法等。

 


一、平板劃線分離法

平板劃線分離法:是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面,通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細(xì)胞,經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落,通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的純種。有時這種單菌落并非都由單個細(xì)胞繁殖而來的,故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點到線”稀釋而達(dá)到分離目的的。

 

為方便劃線,一般培養(yǎng)基不宜太薄,ÿ皿約傾倒20ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)基應(yīng)厚薄均勻,平板表面光滑。劃線分離主要有分區(qū)劃線法和連續(xù)劃線法兩種(如圖1, A、B)。

 

圖1

 

分區(qū)劃線法是將平板分四區(qū),故又稱四分區(qū)劃線法。劃線時ÿ次將平板轉(zhuǎn)動60~70°劃線,ÿ換一次角度,應(yīng)將接種環(huán)上的菌燒死后,再通過上次劃線處劃線;

另一種連續(xù)劃線法是從平板邊緣一點開始,連續(xù)作波浪式劃線直到平板的另一端為止,當(dāng)中不需灼燒接種環(huán)上的菌。

 

1)連續(xù)劃線法

接種環(huán)于酒精燈外焰燒至紅透,接種棒也要充分灼燒,最后再集中燒接種環(huán)至紅。

輕輕搖勻待接種試管,左手手心托待接種試管底側(cè)部,右手執(zhí)接種環(huán),右手小指拔下試管塞,于酒精燈附近將接種環(huán)伸進(jìn)試管,稍候,再插入待接接種液中,蘸一下,取滿一環(huán),抽出、燒塞、蓋蓋、放回試管架;?qū)⒔臃N環(huán)通過稍打開皿蓋的縫隙伸入平板,在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻,然后以無菌操作接種環(huán)直接取平板上待分離純化的菌落。

 

于靠近酒精燈處打開平皿蓋約30°,右手將環(huán)伸進(jìn)平皿,將菌種點種在平板邊緣一處,輕輕涂布于瓊脂培養(yǎng)基邊緣(如圖2),抽出接種環(huán),蓋上平皿蓋,然后將接種環(huán)上多余的培養(yǎng)液在火焰中灼燒,打開平皿蓋約30°伸入接種環(huán),待接種環(huán)冷卻后,再與接種液處輕輕接觸,開始在平板表面輕巧滑動劃線,接種環(huán)不要嵌入培養(yǎng)基內(nèi)劃破培養(yǎng)基,線條要平行密集,充分利用平板表面積,注意勿使前后兩條線重疊,劃線完畢,關(guān)上皿蓋。灼燒接種環(huán),待冷卻后放置接種架上。培養(yǎng)皿倒置于適溫的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)(以免培養(yǎng)過程皿蓋冷凝水滴下,沖散已分離的菌落)。培養(yǎng)后在劃線平板上觀察沿劃線處長出的菌落形態(tài),鏡檢后再接種斜面。

圖2

 

2)分區(qū)劃線法

取菌、接種、培養(yǎng)方法與“連續(xù)劃線法”相似。

分區(qū)劃線法分離時平板分四個區(qū),故又稱四分區(qū)劃線法。其中第4區(qū)是單菌落的主要分布區(qū),故其劃線面積應(yīng)最大。為防止第4區(qū)內(nèi)劃線與1、2、3區(qū)線條相接觸,應(yīng)使4區(qū)線條與1區(qū)線條相平行,這樣區(qū)與區(qū)間線條夾角最好保持120°左右。

 

先將接種環(huán)沾取少量菌在平板1區(qū)劃3~5條平行線,取出接種環(huán),左手關(guān)上皿蓋,將平板轉(zhuǎn)動60~70°,右手把接種環(huán)上多余菌體燒死,將燒紅的接種環(huán)在平板邊緣冷卻,再按以上方法以1區(qū)劃線的菌體為菌源,由1區(qū)向2區(qū)作第2次平行劃線。第2次劃線完畢,同時再把平皿轉(zhuǎn)動約60~70°,同樣依次在3、4區(qū)劃線。劃線完畢,灼燒接種環(huán),關(guān)上皿蓋,同上法培養(yǎng),在劃線區(qū)觀察單菌落。


二、斜面接種法

該法主要用于單個菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細(xì)菌的某些特性。

(1)左手平托兩支試管,拇指按住試管的底部。外側(cè)一支試管是斜面上長有菌苔的菌種試管,內(nèi)側(cè)一支是待接的空白斜面,兩支試管的斜面同時向上。用右手將試管塞旋松,以便在接種時容易拔出。

(2)右手拿接種環(huán)(如握ë筆一樣),在火焰上先將環(huán)端燒紅滅菌,然后將有可能伸入試管的其余部λ也過火滅菌.

(3)將兩支試管的上端并齊,靠近火焰,用右手小指和掌心將兩支試管的試管塞一并夾住拔出,試管塞仍夾在手中,然后讓試管口緩緩過火焰。注意不得將試管塞隨意丟于桌上受到沾污,試管口切勿燒得過燙以免炸裂。

(4)將已灼燒的接種環(huán)伸入外側(cè)的菌種試管內(nèi)。先把接種環(huán)的先端觸及無菌苔的培養(yǎng)基上使其冷卻(如果操作迅速,此時接種環(huán)尚δ完全冷卻)。再根據(jù)需要用接種環(huán)沾取一定量的菌苔,注意勿刮破培養(yǎng)基。將沾有菌苔的接種環(huán)迅速抽出試管,注意勿使接種環(huán)碰到管壁或管口上。

(5)迅速將沾有菌種的接種環(huán)伸入另一支待接斜面試管的底部,輕輕向上劃線(直線或曲線,根據(jù)需要確定),勿劃破培養(yǎng)基表面。

(6)接好種的斜面試管口再次過火焰,試管塞底部過火焰后立即塞入試管內(nèi)。

(7)將沾有菌苔的接種環(huán)在火焰上燒紅滅菌。先在內(nèi)焰中燒灼,使其干燥后,再在外焰中燒紅,以免菌苔驟熱,會使菌體爆濺,造成污染。

(8)放下環(huán)后,再將試管塞旋緊,在試管外面上方距試管口2~3cm處貼上標(biāo)簽。

斜面接種方法及無菌操作過程如下具體操作過程見圖3。

 

圖3


三、穿刺接種法

用接種針經(jīng)火焰滅菌,沾取少量菌種,垂直地穿入試管固體培養(yǎng)基中心至底部,然后將挑起菌落的接種針平行于管壁插入瓊脂斜面底部、沿著原接種線將針拔出、燒試管塞和試管口、塞上試管塞,再將接種針上殘留的菌體在火焰上燒掉。要做到手穩(wěn)、動作輕巧快速。見下圖4。(a:垂直接種法,b:水平接種法)

圖片


四、液體和半固體接種法

1)液體接種法

包括從外面菌種接入培養(yǎng)液,或從液體菌種接入液體培養(yǎng)液,兩種情況都可以用接種環(huán)接種。但在培養(yǎng)量比較大的情況下,液體接種宜采用移液管接種,要求無菌操作。

 

左手持試管,右手將燒灼過的接種環(huán)伸入菌種管,待冷卻后,取菌液一環(huán),立即移入培養(yǎng)基管中,在接近液面的管壁上輕輕研磨,然后將試管稍傾斜,并沾取少許液體調(diào)和,使菌液混合于培養(yǎng)基中。

 

2)半固體培養(yǎng)基接種法   

將燒灼過的接種針插入菌種管冷卻后,沾取菌液少許,立即垂直插入半固體培養(yǎng)基的中心至接近于管底處,但不可直刺至管底,然后循原·退出。管口通過火焰,塞上棉塞,接種針燒灼滅菌后放下。

將上述已接種好的培養(yǎng)物,37℃度恒溫箱內(nèi)培養(yǎng),24小時后取出觀察結(jié)果。

 


五、涂布接種

 

用無菌移液管吸取菌懸液0.1mL,滴加于培養(yǎng)基平板上,右手持無菌涂布棒,左手拿培養(yǎng)皿,并用拇指將皿蓋打開一縫,在火焰旁右手持涂布棒與培養(yǎng)皿平板表面將菌液自平板中央均勻向四周涂布擴散,切忌用力過猛將菌液直接推向平板邊緣或?qū)⑴囵B(yǎng)基劃破。接種后,將平板倒置于恒溫箱中,培養(yǎng)觀察。

編輯:songjiajie2010

 
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