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微生物實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作要求

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2021-10-11
核心提示:實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作要求一、無(wú)菌操作要求食品微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員,必須有嚴(yán)格的無(wú)菌觀念,許多試驗(yàn)要求在無(wú)菌條件下進(jìn)行,主要原因
 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作要求
一、無(wú)菌操作要求

食品微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員,必須有嚴(yán)格的無(wú)菌觀念,許多試驗(yàn)要求在無(wú)菌條件下進(jìn)行,主要原因:一是防止試驗(yàn)操作中人為污染樣品,二是保證工作人員安全,防止檢出的致病菌由于操作不當(dāng)造成個(gè)人污染。


1.需要建立無(wú)菌室管理制度。

2.保持良好的衛(wèi)生:相對(duì)濕度40%-60%,溫度2-22℃,最好安裝空調(diào)。

3.無(wú)菌室不得進(jìn)行其他工作,非操作所使用的物件一律不得放入,檢后的余樣不得存放。

4.紫外燈的使用期限一般為300小時(shí),要記錄使用時(shí)間,到期更換。


5.接種細(xì)菌時(shí)必須穿工作服、戴工作帽。


6.進(jìn)行接種食品樣品時(shí),必須穿專(zhuān)用的工作服、帽及拖鞋,應(yīng)放在無(wú)菌室緩沖間,工作前經(jīng)紫外線(xiàn)消毒后使用。


7.接種食品樣品時(shí),應(yīng)在進(jìn)無(wú)菌室前用肥皂洗手,然后用75%酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?/span>


8.進(jìn)行接種所用的吸管,平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌,打開(kāi)包裝未使用完的器皿,不能放置后再使用,金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃燒灼三次后使用。


9.從包裝中取出吸管時(shí),吸管尖部不能觸及外露部位,使用吸管接種于試管或平皿時(shí),吸管尖不得觸及試管或平皿邊。


10.接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作,接種細(xì)菌或樣品時(shí),吸管從包裝中取出后及打開(kāi)試管塞都要通過(guò)火焰消毒。


11.接種環(huán)和針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲,必要時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處,接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在沸水中煮沸5min,再經(jīng)火焰燒灼。


12.吸管吸取菌液或樣品時(shí),應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取,不得直接用口吸。


二、無(wú)菌間使用要求

 

1.無(wú)菌間通向外面的窗戶(hù)應(yīng)為雙層玻璃,并要密封,不得隨意打開(kāi),并設(shè)有與無(wú)菌間大小相應(yīng)的緩沖間及推拉門(mén),另設(shè)有0.5-0.7m2的小窗,以備進(jìn)入無(wú)菌間后傳遞物品。


2.無(wú)菌間內(nèi)應(yīng)保持清潔,工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒,擦拭工作臺(tái)面,不得存放與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品。


3.無(wú)菌間使用前后應(yīng)將門(mén)關(guān)緊,打開(kāi)紫外燈,如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時(shí),需30W紫外燈,距離在1.0m處,照射時(shí)間不少于30min,使用紫外燈,應(yīng)注意不得直接在紫外線(xiàn)下操作,以免引起損傷,燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭,除去上面灰塵和油垢,以減少紫外線(xiàn)穿透的影響。


4.處理和接種食品標(biāo)本時(shí),進(jìn)入無(wú)菌間操作,不得隨意出入,如需要傳遞物品,可通過(guò)小窗傳遞。


5.在無(wú)菌間內(nèi)如需要安裝空調(diào)時(shí),則應(yīng)有過(guò)濾裝置。

 

6.工作室應(yīng)矮小、平整,面積小,高2.2-2.3米,內(nèi)部裝修應(yīng)平整、光滑,無(wú)凹凸不平或棱角等,四壁及屋頂應(yīng)用不透水之材質(zhì),便于擦洗及殺菌。

7.室內(nèi)采光面積大,從室外應(yīng)能看到室內(nèi)情況。

8.為保證無(wú)菌室的潔凈,無(wú)菌室周?chē)柙O(shè)緩沖走廊,走廊旁再設(shè)緩沖間,其面積可小于無(wú)菌室。

9.無(wú)菌室、緩沖走廊及緩沖間均設(shè)有日光燈及供消毒空氣用紫外燈,殺菌紫外燈離工作臺(tái)以1米為宜 ,其電源開(kāi)關(guān)均應(yīng)設(shè)在室外。

10.無(wú)菌室與緩沖間進(jìn)出口應(yīng)設(shè)拉門(mén),門(mén)與窗平齊,門(mén)縫要封緊,兩門(mén)應(yīng)錯(cuò)開(kāi),以免空氣對(duì)流造成污染。


三、有毒有菌污物處理要求

微生物實(shí)驗(yàn)所用實(shí)驗(yàn)器材、培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理,一律不得帶出實(shí)驗(yàn)室。

1. 經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應(yīng)放在嚴(yán)密的容器或鐵絲筐內(nèi),并集中存放在指定地點(diǎn),待統(tǒng)一進(jìn)行高壓滅菌。


2. 經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物,必須經(jīng)121℃ 30min高壓滅菌。


3. 染菌后的吸管,使用后放入5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中,最少浸泡24h(消毒液體不得低于浸泡的高度)再經(jīng)121℃ 30 min高壓滅菌。


4. 涂片染色沖洗片的液體,一般可直接沖入下水道,烈性菌的沖洗液必須沖在燒杯中,經(jīng)高壓滅菌后方可倒入下水道,染色的玻片放入5﹪煤酚皂溶液中浸泡24 h后,煮沸洗滌。做凝集試驗(yàn)用的玻片或平皿,必須高壓滅菌后洗滌。


5. 打碎的培養(yǎng)物,立即用5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被污染部位,浸泡半小時(shí)后再擦拭干凈。污染的工作服或進(jìn)行烈性試驗(yàn)所穿的工作服、帽、口罩等,應(yīng)放入專(zhuān)用消毒袋內(nèi),經(jīng)高壓滅菌后方能洗滌。

 

四、樣品采集及處理要求

1.所采集的檢驗(yàn)樣品一定要具有代表性,采樣時(shí)應(yīng)首先對(duì)該批食品原料、加工、運(yùn)輸、貯藏方法條件、周?chē)h(huán)境衛(wèi)生狀況等進(jìn)行詳細(xì)調(diào)查,檢查是否有污染源存在。


2.根據(jù)食品的種類(lèi)及數(shù)量,采樣數(shù)量及方法應(yīng)按標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法的要求進(jìn)行。


3.采樣應(yīng)注意無(wú)菌操作,容器必須滅菌,避免環(huán)境中微生物污染,容器不得使用煤酚皂溶液,用新潔爾滅、酒精等消毒藥物滅菌,更不能含有此類(lèi)消毒藥物或抗生素類(lèi)藥物,以避免殺死樣品中的微生物,所用剪、刀、匙用具也需滅菌方可應(yīng)用。


4.樣品采集后應(yīng)立即送往檢驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn),送檢過(guò)程中一般不超過(guò)3h,如路程較遠(yuǎn),可保存在1-5℃環(huán)境中,如需冷凍者,則在凍存狀態(tài)下送檢。


5.檢驗(yàn)室收到樣品后,進(jìn)行登記(樣品名稱(chēng)、送檢單位、數(shù)量、日期、編號(hào)等),觀察樣品的外觀,如果發(fā)現(xiàn)有下列情況之一者,可拒絕檢驗(yàn)。

(1) 樣品經(jīng)過(guò)特殊高壓、煮沸或其他方法殺菌者,失去代表原食品檢驗(yàn)意義者。

(2) 瓶、袋裝食品已啟開(kāi)者,熟肉及其制品、熟禽等食品已折碎不完整者,即失去原食品形狀者(食物中毒樣品除外)。

(3) 按規(guī)定采樣數(shù)量不足者。

對(duì)送檢符合要求的樣品,檢驗(yàn)室收到后,應(yīng)立即進(jìn)行檢驗(yàn),如果條件不具備,應(yīng)置4℃冰箱存放,及時(shí)準(zhǔn)備創(chuàng)造條件,然后進(jìn)行檢驗(yàn)。


6.樣品檢驗(yàn)時(shí),根據(jù)其不同性狀,進(jìn)行適當(dāng)處理。

(1) 液體樣品接種時(shí),應(yīng)充分混合均勻,按量吸取進(jìn)行接種。

(2) 固體樣品,用滅菌刀、剪取其不同部位共25g,置于225ml滅菌生理鹽水或其他溶液中,用均質(zhì)器攪碎混勻后,按量吸取接種。

(3) 瓶、袋裝食品應(yīng)用滅菌操作啟開(kāi),根據(jù)性狀選擇上述方法處理后接種。

 

五、樣品檢驗(yàn)、記錄和報(bào)告的要求

1.檢驗(yàn)室收到樣品后,首先進(jìn)行外觀檢驗(yàn),及時(shí)按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢驗(yàn),檢驗(yàn)過(guò)程中要認(rèn)真、負(fù)責(zé)、嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作,避免環(huán)境中微生物污染。


2.樣品檢驗(yàn)過(guò)程中所用方法、出現(xiàn)的現(xiàn)象和結(jié)果等均要用文字寫(xiě)出試驗(yàn)紀(jì)錄,以作為對(duì)結(jié)果分析、判定的依據(jù),記錄要求詳細(xì)、清楚、真實(shí)、客觀、不得涂改和偽造。

 

 

六、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)記錄與報(bào)告管理規(guī)范
1

記錄

 

記錄是為已完成的活動(dòng)或達(dá)到的結(jié)果提供客觀證據(jù)的文件。記錄的作用主要是為檢測(cè)工作的質(zhì)量效用提供客觀證據(jù),為預(yù)防和糾錯(cuò)溯源提供依據(jù)。

 

1.1 記錄的基本要求

⑴檢測(cè)測(cè)試過(guò)程的基本步驟和依據(jù);

⑵參加檢測(cè)人員的資格;

⑶檢測(cè)使用的儀器設(shè)備及場(chǎng)地;

⑷檢測(cè)實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件;

⑸檢測(cè)分析的數(shù)據(jù);

⑹檢測(cè)分析結(jié)果的判斷;

⑺檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)論等。

 

1.2 記錄種類(lèi)

凡對(duì)檢測(cè)工作質(zhì)量和質(zhì)量體系運(yùn)行有效性有關(guān)的、需要證實(shí)的所有方面,都必須認(rèn)真做好記錄。

與檢測(cè)質(zhì)量有關(guān)的記錄分為技術(shù)記錄和質(zhì)量記錄兩類(lèi)。

⑴技術(shù)記錄

技術(shù)記錄是進(jìn)行檢測(cè)所得數(shù)據(jù)和信息的積累。包括檢測(cè)過(guò)程的原始記錄、導(dǎo)出數(shù)據(jù)(簡(jiǎn)稱(chēng)原始記錄)、合同、任務(wù)單,以及與檢測(cè)工作相關(guān)的技術(shù)方案、采樣點(diǎn)設(shè)置圖等說(shuō)明資料。

⑵質(zhì)量記錄

質(zhì)量記錄是客觀反映質(zhì)量或質(zhì)量體系運(yùn)行過(guò)程的信息載體,主要包括質(zhì)量體系內(nèi)審和質(zhì)量管理評(píng)審的記錄與報(bào)告、質(zhì)量監(jiān)督、儀器設(shè)備運(yùn)行檢查、儀器設(shè)備和計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)檔案、人員培訓(xùn)記錄檔案、申訴以及糾正措施或預(yù)防措施等。

 

1.3 記錄管理

⑴所有的記錄必須指定專(zhuān)人負(fù)責(zé)管理;

⑵制訂各類(lèi)記錄的保存期限;

⑶涉及客戶(hù)的記錄應(yīng)制定保密措施,以保護(hù)客戶(hù)信息和所有權(quán);

⑷記錄應(yīng)保存在適宜的環(huán)境及設(shè)施中,有效防止污損、變質(zhì)、蟲(chóng)蛀和丟失;

⑸記錄的維護(hù)管理、查閱或借閱應(yīng)符合保護(hù)客戶(hù)信息和所有權(quán)程序要求;

⑹超過(guò)保管期限的記錄,由管理人員造冊(cè),經(jīng)批準(zhǔn)后,按有關(guān)程序予以處理。

 

1.4 檢測(cè)原始記錄規(guī)范

原始記錄是編制檢測(cè)報(bào)告的主要依據(jù),也是必要和可能時(shí)再現(xiàn)試驗(yàn)的依據(jù),因此必須記錄完整、真實(shí)、清楚,對(duì)涂改應(yīng)作出統(tǒng)一規(guī)定。原始記錄除試驗(yàn)數(shù)據(jù)和觀察記錄外,還要對(duì)所用儀器設(shè)備、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、環(huán)境條件、試驗(yàn)參數(shù)、樣品編號(hào)及其狀態(tài)、測(cè)試過(guò)程中的異,F(xiàn)象進(jìn)行如實(shí)記錄。

檢測(cè)原始記錄是檢測(cè)工作活動(dòng)軌跡的客觀證據(jù),是形成檢測(cè)報(bào)告的原始憑證,因此必須規(guī)范化。

⑴原始記錄信息要完整。

原始記錄應(yīng)包括以下內(nèi)容:

a)檢測(cè)的方法依據(jù);

b)使用的儀器設(shè)備名稱(chēng)、型號(hào)及編號(hào);

c)檢測(cè)時(shí)的被測(cè)樣品標(biāo)識(shí);

d)檢測(cè)時(shí)的環(huán)境條件;

e)檢測(cè)觀察結(jié)果、數(shù)據(jù)及其計(jì)算;

f)檢測(cè)人員和復(fù)核人員簽字;

g)其他必要的說(shuō)明。

⑵原始記錄填寫(xiě)人員應(yīng)準(zhǔn)確、規(guī)范、完整、客觀地記錄相關(guān)內(nèi)容,不得使用鉛筆書(shū)寫(xiě);

⑶原始記錄因筆誤或計(jì)算錯(cuò)誤需要更改時(shí),應(yīng)按規(guī)定的程序進(jìn)行修改。如使用單桿劃去原數(shù)據(jù),在其右上方寫(xiě)上正確數(shù)據(jù),并有更改人的簽章;

⑷正確使用法定計(jì)量單位;

⑸使用統(tǒng)一格式的原始記錄。

 

2

報(bào)告

檢測(cè)報(bào)告是檢測(cè)機(jī)構(gòu)向客戶(hù)提供的最終產(chǎn)品,也是檢測(cè)機(jī)構(gòu)工作質(zhì)量的最終體現(xiàn),因此檢測(cè)機(jī)構(gòu)應(yīng)準(zhǔn)確、清晰和客觀報(bào)告進(jìn)行的每一項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果。

 

2.1 檢測(cè)報(bào)告基本要求

⑴檢測(cè)報(bào)告的編制應(yīng)符合國(guó)家有關(guān)法律法規(guī)及檢測(cè)機(jī)構(gòu)所建立的質(zhì)量體系文件的規(guī)定;

⑵報(bào)告中所使用的術(shù)語(yǔ)、定義應(yīng)與現(xiàn)行有效的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、技術(shù)規(guī)范一致;

⑶使用法定計(jì)量單位;

⑷檢測(cè)數(shù)據(jù)的處理與表達(dá)方式應(yīng)與現(xiàn)行有效的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、技術(shù)規(guī)范一致;

⑸必須加蓋相關(guān)的印章;

⑹若有分包項(xiàng)目應(yīng)注明,必要時(shí)可詳細(xì)說(shuō)明。

 

2.2 檢測(cè)報(bào)告內(nèi)容

檢測(cè)報(bào)告應(yīng)包括以下信息:

a)標(biāo)題;

b)檢測(cè)機(jī)構(gòu)名稱(chēng)、地址及聯(lián)系電話(huà);

c)檢測(cè)報(bào)告唯一性標(biāo)識(shí),報(bào)告總頁(yè)數(shù)及頁(yè)碼;

d)客戶(hù)的相關(guān)信息;

e)檢測(cè)樣品的描述說(shuō)明和明確標(biāo)識(shí);

f)檢測(cè)樣品的特性及狀態(tài);

g)檢測(cè)方法技術(shù)依據(jù)及說(shuō)明;

h)檢測(cè)儀器設(shè)備及檢測(cè)環(huán)境條件;

i)檢測(cè)的結(jié)果,并適當(dāng)輔以表格或簡(jiǎn)圖加以說(shuō)明;

j)報(bào)告批準(zhǔn)(或經(jīng)授權(quán))人、審定人(適用時(shí))、審核人、編制人的簽字或等同的標(biāo)識(shí);

k)報(bào)告的有效性聲明;

l)對(duì)估算的監(jiān)測(cè)結(jié)果不確定度的說(shuō)明(如果適用);

m)特定方法、客戶(hù)要求附加的信息(適用時(shí))。

 

2.3 檢測(cè)報(bào)告審核與簽發(fā)

⑴報(bào)告審核

檢測(cè)報(bào)告在簽發(fā)前必須進(jìn)行校對(duì)和審核。校對(duì)主要是對(duì)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)移、計(jì)算處理及報(bào)告內(nèi)容差漏進(jìn)行校對(duì);審核是對(duì)報(bào)告的完整性、項(xiàng)目的齊全性、依據(jù)的正確性以及結(jié)論的正確性進(jìn)行審查,審查內(nèi)容包括:

①檢測(cè)所依據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)、方法、指導(dǎo)書(shū)的有效性;

②檢測(cè)所依據(jù)方法、儀器設(shè)備、環(huán)境條件選用、數(shù)據(jù)計(jì)算以及所有文字、符號(hào)、計(jì)量單位的正確性;

③報(bào)告的檢測(cè)結(jié)果與檢測(cè)原始記錄的一致性;

④報(bào)告內(nèi)容及其檔案要件的完整性;

⑤報(bào)告結(jié)論的正確性及報(bào)告編制的規(guī)范性。

⑵報(bào)告簽發(fā)

經(jīng)審核的檢測(cè)報(bào)告由法人或其授權(quán)簽字人簽發(fā),同時(shí)應(yīng)指定專(zhuān)人負(fù)責(zé)待發(fā)檢測(cè)報(bào)告的管理,實(shí)行領(lǐng)用登記制度。

有關(guān)人員從報(bào)告編制、審核到發(fā)布或傳遞檢測(cè)報(bào)告均應(yīng)遵循保護(hù)客戶(hù)信息和所有權(quán)程序的相關(guān)規(guī)定。

 

報(bào)告由檢測(cè)機(jī)構(gòu)的負(fù)責(zé)人或其授權(quán)簽字人簽發(fā),對(duì)于授權(quán)簽字人應(yīng)滿(mǎn)足以下要求:

①相應(yīng)授權(quán)簽字領(lǐng)域的資格和經(jīng)驗(yàn);

②能參與監(jiān)督日常報(bào)告產(chǎn)生的關(guān)鍵過(guò)程;

③熟悉檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)程序(包括理論基礎(chǔ)知識(shí)和技術(shù)領(lǐng)域的實(shí)際能力);

④能對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行科學(xué)的分析評(píng)價(jià);

⑤熟悉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系的知識(shí);

⑥熟悉評(píng)審機(jī)構(gòu)方針、政策以及對(duì)實(shí)驗(yàn)室的有關(guān)要求;

⑦有足夠的時(shí)間參與實(shí)驗(yàn)室工作,熟悉實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系和業(yè)務(wù)工作的開(kāi)展。

 

2.4 檢測(cè)報(bào)告更改

檢測(cè)報(bào)告的更正是指對(duì)檢測(cè)機(jī)構(gòu)已簽發(fā)批準(zhǔn)送達(dá)客戶(hù)后,因出現(xiàn)下列原因之一需要對(duì)檢測(cè)報(bào)告進(jìn)行的更正或補(bǔ)充。

①發(fā)現(xiàn)檢測(cè)報(bào)告對(duì)應(yīng)的檢測(cè)儀器設(shè)備出現(xiàn)問(wèn)題,且已影響到該檢測(cè)報(bào)告所涉及的檢測(cè)結(jié)果;

②發(fā)現(xiàn)由于采用了不正確或不完善的檢測(cè)方法,導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果有誤;

③發(fā)現(xiàn)出具的檢測(cè)報(bào)告有其他錯(cuò)誤;

④為滿(mǎn)足客戶(hù)的合理要求。

報(bào)告的更改可采用以下方式:

①發(fā)布一個(gè)新的檢測(cè)報(bào)告,以替代原檢測(cè)報(bào)告。新報(bào)告應(yīng)有新的編號(hào),并標(biāo)明替代的舊報(bào)告號(hào);

②以"報(bào)告的更改或補(bǔ)充的通知"的形式通知客戶(hù)(尤其是采用電子傳輸時(shí)),應(yīng)統(tǒng)一編制這種文件格式。

 

2.5 檢測(cè)報(bào)告結(jié)論評(píng)價(jià)用語(yǔ)模式的建立

⑴所檢項(xiàng)目全部合格

模式:該樣品所檢項(xiàng)目符合GB×標(biāo)準(zhǔn)。

舉例:該樣品所檢項(xiàng)目符合GB 2717-2018 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 醬油。

 

⑵所檢項(xiàng)目全部不合格

模式:該樣品所檢項(xiàng)目不符合GB×標(biāo)準(zhǔn)。

舉例:該樣品所檢項(xiàng)目不符合GB 2717-2018 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 醬油。

 

⑶所檢項(xiàng)目少數(shù)不合格

模式:該樣品所檢項(xiàng)目中×不符合GB×標(biāo)準(zhǔn),其余項(xiàng)目合格。

舉例:該樣品所檢項(xiàng)目中氨基酸態(tài)氮不符合GB 2717-2018 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 醬油,其余項(xiàng)目合格。


⑷所檢項(xiàng)目少數(shù)合格

模式:該樣品所檢項(xiàng)目中×符合GB×標(biāo)準(zhǔn),其余項(xiàng)目不合格。

舉例:該樣品所檢項(xiàng)目中砷符合GB 2717-2018 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 醬油,其余項(xiàng)目不合格。

 

⑸參照標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)

模式:參照GB×標(biāo)準(zhǔn),該樣品所檢項(xiàng)目…,即先加入"參照GB×標(biāo)準(zhǔn)",其后與上述相同。

編輯:songjiajie2010

 
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