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【干貨】干粉培養(yǎng)基煮沸滅菌的操作方法及注意事項

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2021-06-07
核心提示:滅菌方法簡介培養(yǎng)基在使用之前必須進行滅菌處理,將其所含活菌全部殺死或全部除去。常用的滅菌方法有過濾除菌、干熱滅菌、濕熱滅
 滅菌方法簡介
 
培養(yǎng)基在使用之前必須進行滅菌處理,將其所含活菌全部殺死或全部除去。常用的滅菌方法有過濾除菌、干熱滅菌、濕熱滅菌及輻照滅菌等。其中,濕熱滅菌法又包括四種方式:煮沸法、流動蒸汽滅菌法、間歇滅菌法和壓力蒸汽滅菌法。通常來說,使用比較多的是壓力蒸汽滅菌法。
 
但是對于有些培養(yǎng)基來說,高壓條件會損壞培養(yǎng)基中的某些成分,不利于培養(yǎng)基的使用,所以只能采用煮沸滅菌的處理方法。本文主要就煮沸滅菌方法進行討論。

煮沸滅菌的常見表述
 
有關(guān)煮沸滅菌的描述,通常有如下幾種方式:
a、稱取本品41. 5g,加熱溶解于1000mL蒸餾水中,煮沸不要超過2分鐘。無需高壓滅菌。臨用時制備,不得超過3小時。
 
b、稱取本品50. 3g,加入1000mL蒸餾水中,加熱煮沸至完全溶解,冷至45-50℃, 搖勻,傾入無菌平皿備用。無需高壓滅菌。
 
c、稱取本品89g,煮沸溶解于1000mL蒸餾水中,冷至45-50℃時,傾入無菌平皿,備用。注:無需高壓滅菌。
 
d、稱取本品57g,加熱攪拌溶解于1000mL蒸餾水中,不要過分加熱,冷至50-55℃時,傾入無菌平皿,部分開蓋干燥2h,然后蓋上,備用。無需高壓滅菌。在24小時內(nèi)使用。 
這些方法描述中,都特別強調(diào)“無需高壓滅菌”、“不要過分熱”、“煮沸充分溶解”,那么究竟該怎樣操作,才能達到既滅菌完全又盡量降低對培養(yǎng)基的破壞呢?
 

煮沸滅菌的實際操作
1、關(guān)于煮沸方式,有人提出可以隔水煮沸,但經(jīng)過反復(fù)試驗,發(fā)現(xiàn)這種煮沸方式存在兩大弊端:①溫度不夠,達不到滅菌效果;②經(jīng)隔水煮沸的含瓊脂培養(yǎng)基,在水浴的過程中易出現(xiàn)分層現(xiàn)象。
2、為了對培養(yǎng)基進行有效煮沸滅菌,根據(jù)我們實踐摸索,建議如下操作:
①準(zhǔn)備好電磁爐和搪瓷缸(不要用鐵質(zhì)容器) ;
②將培養(yǎng)基按比例加水,稱量至搪瓷缸中,用玻璃棒不斷攪拌,直至完全溶解、無明顯團狀物或顆粒;
③將搪瓷缸置于電磁爐上,大火燒開,期間持續(xù)攪拌,避免糊底;當(dāng)液面完全沸騰后,立即將搪瓷缸從電磁爐上拿開,算是一次煮沸操作;液面回落后,立即放回電磁爐,重復(fù)上面的步驟;總共煮沸3次即可。
④將煮好的培養(yǎng)基冷卻至需要的溫度,進行傾注平皿等操作。
 

注意事項
 
1、補水
加熱煮沸的過程,培養(yǎng)基中的部分水分會蒸發(fā)掉,造成水分偏少,影響培養(yǎng)基的質(zhì)量(如平板強度等),導(dǎo)致菌落形態(tài)等結(jié)果的偏差,因此為了盡量減少誤差,需要在煮沸之前,向搪瓷缸中補加適量培養(yǎng)基配制用水,經(jīng)驗估計,通常每煮一缸培養(yǎng)基需補加15- 20mL水,實際操作中,需根據(jù)各實驗室的具體情況(容器大小及裝量)進行摸索。
2、溶解
所有的培養(yǎng)基,在煮之前必須攪拌至完全溶解,不允許將尚有成團培養(yǎng)基的狀態(tài)下,直接進行加熱煮沸,那樣很容易出現(xiàn)滅菌不徹底的現(xiàn)象,尤其是有些含瓊脂的培養(yǎng)基,甚至?xí)胁糠汁傊荒軓氐兹芙,?dǎo)致倒出的平皿上有明顯的麩皮狀瓊脂小顆粒,或者有些含有染料的培養(yǎng)基也可能出現(xiàn)染料顆粒,都會影響培養(yǎng)基的使用。
 
3、攪拌
煮沸全程必須持續(xù)不斷攪拌,以免糊底。
4、防燙
液面沸騰后,要及時將搪瓷缸從電磁爐上取下,以免液體沸出,造成培養(yǎng)基沾染或燙傷操作人員。

 
編輯:songjiajie2010

 
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