1．試驗(yàn)材料

(1)嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（也可用成套測(cè)試管）。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillus stearothermophilus)。

ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-105 CFU/片。

(2) 121℃壓力蒸氣滅菌化學(xué)指示卡（常見的滅菌指示帶也可）。

(3)溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基115℃高壓滅菌20分鐘后備用

(4)0-150℃留點(diǎn)溫度計(jì)（須計(jì)量局校準(zhǔn)）。

2．方法與結(jié)果

將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡(jiǎn)稱菌片）用無(wú)菌鑷子放人密封試管中。化學(xué)指示卡和留點(diǎn)溫度計(jì)放入敞口試管中。以上兩種試管各準(zhǔn)備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層，則需放10處。

留點(diǎn)溫度計(jì)標(biāo)化合格后方可用于驗(yàn)證試驗(yàn)。檢測(cè)前，需將溫度計(jì)的水銀柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測(cè)后留點(diǎn)溫度計(jì)的溫差應(yīng)在1℃之間，則說明滅菌器內(nèi)的溫度分布是均勻的。

滅菌后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無(wú)菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時(shí)，觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)?/span>黃色，說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活，細(xì)菌仍可在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色，則說明芽胞已滅活。同時(shí)要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽(yáng)性對(duì)照，不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。

化學(xué)指示卡上的指示色塊，在高壓蒸氣滅菌時(shí)，由淡黃色變?yōu)楹谏?/span>。隨著顏色變化的深淺，并與對(duì)照色相比，可判斷滅菌效果是否達(dá)到要求。化學(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會(huì)變色，影響滅菌效果的觀測(cè)。

高壓蒸氣滅菌必須使蒸氣順利進(jìn)入滅菌器內(nèi)，與滅菌物品接觸，并將原有的冷空氣排出方可達(dá)到滅菌的效果。要進(jìn)行空載熱分布和滿載熱穿透力驗(yàn)證(滿載時(shí)不超過總體積的2/3)。二種驗(yàn)證各重復(fù)三次，共做六次。

5個(gè)點(diǎn)六次試驗(yàn)表明溫度均在121℃，化學(xué)指示卡變黑；程度與對(duì)照色一致；培養(yǎng)基均未改變顏色，說明高壓蒸氣滅菌效果合格。

高壓滅菌器屬于強(qiáng)檢儀器，但強(qiáng)檢只是對(duì)儀器物理參數(shù)的考核。所以做過強(qiáng)檢的滅菌器還必須進(jìn)行滅菌效果的驗(yàn)證。一些單位常常忽略了這個(gè)重要的問題。國(guó)內(nèi)市售的手提滅菌器，往往儀器指針達(dá)到所需的溫度，但滅菌物品的實(shí)際溫度卻未達(dá)到要求。導(dǎo)致滅菌物品不徹底，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。培養(yǎng)基滅菌不徹底，影響培養(yǎng)基的使用及結(jié)果判斷。因此高壓蒸氣滅菌器無(wú)菌效果的驗(yàn)證是一個(gè)必須引起重視的問題。

附：滅菌時(shí)的注意事項(xiàng)（一些進(jìn)口的全自動(dòng)滅菌鍋可不用考慮排氣）

使用高壓蒸氣滅菌器時(shí)，首先應(yīng)注意在開放蒸氣的同時(shí)，排除滅菌器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后，才可關(guān)閉排氣孔。假如滅菌器內(nèi)仍存留有部分空氣時(shí)，則壓力表上雖已達(dá)到了某一壓力值，但器內(nèi)之溫度仍未達(dá)到相應(yīng)之度數(shù)。存留的空氣越多，則二者相差也越大，器內(nèi)溫度不足，滅菌則不徹底。（很多人在做發(fā)酵法培養(yǎng)基滅菌時(shí)會(huì)出現(xiàn)小導(dǎo)管中有氣泡，不妨也可以嘗試多排出滅菌器內(nèi)的冷空氣，有奇效哦）。