GB/T 4789.3-2003 大腸菌群測定

03版只有一個方法：MPN法，也有人叫九管法。

陽性的方法步驟：

制樣→接種到乳糖膽鹽發(fā)酵管→伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基→乳糖發(fā)酵管（同時做革蘭氏染色）→看表計算。

其實這個方法比較簡單的一個方法，也是常說的半定量的方法。

我們下面說一下這個方法的注意事項。

第一，這個方法是一個半定量的方法，最不好要用于測量審核上。

第二，做實驗前要注意導(dǎo)管里是否有空氣（最好使用大直徑的小導(dǎo)管），以免影響結(jié)果的判斷，增加工作量。

第三，經(jīng)常有人會無視標(biāo)準(zhǔn)有一個糞大腸的檢測步驟。這個很少人會去做。

第四，對伊紅美藍(lán)的陽性現(xiàn)象不了解（其實實驗室可以在做出陽性結(jié)果之后，將菌接出來，以后用來做人員培訓(xùn)）。

第五，對標(biāo)準(zhǔn)是否還在實行不清楚，很多人在16版出來的時候，都在問03版是不是也作廢了，其實并沒有。03版目前還在執(zhí)行著（畢竟還有些標(biāo)準(zhǔn)還在用著它的單位）。

GB 4789.3-2016  大腸菌群計數(shù)

這個標(biāo)準(zhǔn)里有兩個方法：MPN法和平板計算。

首先說MPN法，它相對于03版的MPN有一定的區(qū)別。第一這兩個方法用的培養(yǎng)基完全不一樣。第二16版的方法沒有伊紅美藍(lán)畫線，這樣的過程減少了一步相對簡單一點。第三單位變了。

平板法：其實平板是我們目前用得最多的一個方法，步驟看標(biāo)準(zhǔn)的實驗流程圖。

那么平板法有什么注意的呢？

第一，做平板法的時候需要覆蓋第二層培養(yǎng)基，它的作用是：有助于典型菌落形成也為了防止蔓延性細(xì)菌生長。

第二，挑菌，其實這一步主要怕挑菌的時候挑不到菌，其實你可以把帶菌的部分培養(yǎng)基完全挑起來（不要怕培養(yǎng)基包含著它出不來）放到BGLB內(nèi)，然后用手腕力搖一下試管就可以把培養(yǎng)基打碎。

第三，計算問題，標(biāo)準(zhǔn)挑取10個典型菌落。然后計算比例再乘以所有典型菌落的數(shù)（有人會在這里糾結(jié)，覺得不太準(zhǔn)確，應(yīng)該所有菌落都挑取）其實這個一個想法很好，但是這樣之后增加工作量的同時影響效率。其實在平板上你應(yīng)該區(qū)分典型菌落出來去做就可以（當(dāng)然這步要考驗一個人的眼力和經(jīng)驗）初學(xué)者可以根據(jù)形態(tài)進(jìn)行分類，然后以形態(tài)特征進(jìn)行驗證。

兩個版本的一些檢測方法和注意事項都說了，那么我們說一下一些朋友常問的一些問題。

1. 03版的結(jié)果能不能和10版的結(jié)果進(jìn)行換算和比較。

答：其實換算是不行的，這個兩個不同的標(biāo)準(zhǔn)。如果只是進(jìn)行比較兩個結(jié)果是可以的，但是不建議。

2.如何選擇檢測方法？

答：你要根據(jù)產(chǎn)品的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)去選擇檢測方法，不是說你喜歡那種就可以用那種。

3、同一批產(chǎn)品，檢測的兩份結(jié)果不一樣，是不是那里出問題？

答：其實不是出問題，這個是正常的，同一批產(chǎn)品不代表他們的微生物檢測結(jié)果是一模一樣的，如果是這樣也沒必要做五份去驗證產(chǎn)品合格了吧？如果說同一份樣品（制成一份樣）出現(xiàn)結(jié)果差好遠(yuǎn)的話，這里就要去分析那里出問題。

好像就這些問題比較常見。