(1)在肉膏蛋白胨斜面試管上,用記號(hào)筆寫(xiě)上將接種的菌名、日期和接種者。
(2)點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈。
(3)將菌種試管和待接種的斜面試管,用大拇指和食指、中指、無(wú)名指握在左手中,并將中指夾在兩試管之間,使斜面向上,成水平狀態(tài),。在火焰邊用右手松動(dòng)試管塞,以利于接種時(shí)拔出。
(4)右手拿接種環(huán)通過(guò)火焰燒灼滅菌(參照實(shí)驗(yàn)一),在火焰邊用右手的手掌邊緣和小指,小指和無(wú)名指分別夾持棉塞(或試管帽),將其取出,并迅速燒灼管口。
(5)將滅菌的接種環(huán)伸入菌種試管內(nèi),先將環(huán)接觸試管內(nèi)壁或未長(zhǎng)菌的培養(yǎng)基,達(dá)到冷卻的目的,然后再挑取少許菌苔。將接種環(huán)退出菌種試管,迅速伸入待接種的斜面試管,用環(huán)在斜面上自試管底部向上端輕輕地劃直線,勿將培養(yǎng)基劃破,也不要使環(huán)接觸管壁或管口。
(6)接種環(huán)退出斜面試管,再用火焰燒管口,并在火焰邊將試管塞塞上。將接種環(huán)逐漸接近火焰,再燒灼。如果接種環(huán)上沾的菌體較多時(shí),應(yīng)先將環(huán)在火焰邊烤干,然后燒灼,以免未燒死的菌種飛濺出污染環(huán)境,接種病原菌時(shí)更要注意此點(diǎn)。
二、液體培養(yǎng)基接種
向肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種少量菌體時(shí),其操作步驟基本與斜面接種時(shí)相同,不同之處是挑取菌體的接種環(huán)放入液體培養(yǎng)基后,應(yīng)在液體表面處的管內(nèi)壁上輕輕磨擦,使菌體從環(huán)上脫落,混進(jìn)液體培養(yǎng)基,塞好試管塞后,搖動(dòng)液體,使菌體在液體中分布均勻,或用試管振蕩器混勻。
向液體培養(yǎng)基中接種量大或要求定量接種時(shí),可將無(wú)菌水或液體培養(yǎng)基注入菌種試管,用接種環(huán)將菌苔刮下,再將菌種懸液以無(wú)菌吸管定量吸出加入,或直接倒入液體培養(yǎng)基。如果菌種為液體培養(yǎng)物,則可用無(wú)菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養(yǎng)基。整個(gè)接種過(guò)程都要求無(wú)菌操作。
三、穿刺接種
用接種針挑取菌種(針必須挺直),自培養(yǎng)基的中心垂直地刺入半固體培養(yǎng)基中,直至接近管底,但不要穿透,然后沿原穿刺線將針拔出,塞上試管塞,燒灼接種針。
上述幾種接種法的無(wú)菌操作,凡未敘述的均按實(shí)驗(yàn)一操作。試驗(yàn)者應(yīng)反復(fù)練習(xí)無(wú)菌操作接種技術(shù),直至較熟練地掌握。
四、將已接種的斜面、液體和半固體培養(yǎng)基放置28—30℃溫箱,培養(yǎng)2—3天后取出觀察結(jié)果。